矛盾？ アポトーシスについて

質問

フローサイトメトリーでアポトーシスした細胞を測定する方法に
annexin V positive and PI negativeの細胞をひろう
ということがされているようですが、

sub G1細胞の検出ではPI positiveをひろう

sub G1細胞はアポトーシスが誘導された細胞に含まれると思いますが、
では、PI positiveはアポトーシスが誘導された細胞細なのかどうか、理解に苦しんでいます。

ご教授お願いします

回答No.1

MIYD · ベストアンサー

アポトーシスの段階と、染色(固定)条件の違いを区別せずに、
染色の結果だけを見ていませんか？

>annexin V positive and PI negativeの細胞をひろう
通常の方法であれば、アポトーシス初期の細胞を検出できます。

>sub G1細胞の検出ではPI positiveをひろう
positiveを拾うのではなく、固定後に染色して流して、sub G1を検出します。
固定せずに染色して流したのであれば、死細胞を検出したと考えます。

>sub G1細胞はアポトーシスが誘導された細胞に含まれると思いますが
あってます。

>PI positiveはアポトーシスが誘導された細胞
どの条件でのPI positiveですか？
固定していれば全てがpositiveですし、
固定していなければ、死細胞を検出したと考えます。アポトーシスしているかはこれだけでは分かりません。

お礼

さっそくのご回答ありがとうございます。
論文の内容なのですが、、

１．sub G1細胞の検出
　固定したかどうかはこの論文には書かれていませんでした。
単に「sub G1細胞を検出するためPI染色を行った」とあったので、
おそらく染色後だと思います。

２．アポトーシスが誘導された細胞
　これも固定したかどうかは書かれていませんでした。
単に「アネキシンのキットを用いた」とあったので、
その会社の製品をネットで調べたら
『PBS洗浄した細胞にアネキシンとPI等の試薬を加えてFACSにかける』
ありました。なので、これは未固定だと思います。

加えて、教えてください
未固定の場合、PIで染まるのはネクローシスの細胞だけ（細胞膜の崩壊による）。
でよろしいのでしょうか？

回答No.2

MIYD

>未固定の場合、PIで染まるのはネクローシスの細胞だけ
アポトーシスした細胞でも、ある程度アポトーシスが進むとPIで染まるそうです。
Sub G1になる前なのか後なのかは知りません。