架橋剤DSPについて

質問

現在架橋剤(DSP)を用いてあるタンパクータンパク相互作用を検出しようとしているのですが、氷上でDSP stock(50mM in DMSO)をcell lysateに1mMになるよう加えると白濁し、全然溶けません。論文を見て試薬を調整しているので、濃度などが間違っている訳ではないと思うのですが、なにぶん論文だけを参考にしているので、何か間違っているのかもしれません。もし行ったことがある方がいれば、教えて下さい。

回答No.2

noname#246619

経験者ではありませんので詳細はわかりませんが、
DSPは水には不要なようなのでDTSSPを使ってはいかがですか？

参考URL：

http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?type=File&ID=0544

補足

私のような実験の先行研究ではDSPを用いていたので問題ないと思いますが、、、。DTSSPは結晶構造解析のような時に使っているみたいだったので、選びませんでした。

回答No.1

ga111

文献は少なくとも３つくらい、独立のを参考に試したほうがいいかも知れません。

＞白濁し、全然溶けません。
少しだけ溶けたのが効くということもありえるかも。

いずれにせよ、うまくいくポジコンがあるとモノがいえますね。

補足

回答ありがとうございました。

文献は４つ調べ、ラボプロトコール集もググって
ヒットしたものは読みました。その結果２種類の
方法で試してみましたが、いずれも沈殿ができて
しまいました。

絶対うまくいくポジコンではないですが、ダイマー
形成すると考えられるタンパクでやっています。
また、そのタンパクと結合する内在性の抗体
も持っているので、それで判断できると思って
います。