核酸構成成分のHPLC

質問

初めて質問します。
HPLCを使用し、AMP、ADP,ATPを分離するという実験を行いました。
その結果多分AMP,ADP,ATPの順番に分離されたと思うのですが、これらはなぜこの順番に分離されたのかがわかりません。どなたかぜひ教えてください。
溶離液として、NH4Cl、KH2PO4、K2HPO4を用いました。
装置はL6000型日立高速液体クロマトポンプです

回答No.4

rei00 · ベストアンサー

rei00 です。補足拝見しました。

　補足の内容ですと，分離はイオン交換によっていますので，簡単に言うと，電荷の大きいものほど強く吸着される（遅く溶出される）事になります。

　詳細は，MiJun さんお示しのペ－ジの「講座」中の「HPLC入門講座」のイオン交換カラムの説明などをご覧下さい。あるいは，分析化学や液体クロマトグラフィ－のイオン交換に関する記述をご覧下さい。

> >Hitachi Gel #3013N
> >rei00さん、これはShodexのＯＥＭ版でしょうか・・・？
　どうなんでしょうか？日立の液クロもカラムも使用経験がありませんので分かりません。日立のペ－ジ（↓）も見ましたが，該当しそうなカラムは見付けられませんでした。そこの記載では，最近では（？）メルクと提携しているようですので，そちら関連かも知れません。

参考URL：

http://www.hisco.co.jp/ai/

お礼

色々とありがとうございました。
電荷の大きさにより、分離が変わる。。。
自分の勉強不足のため理解がなんとなくなので、
教えていただいた参考サイトをよく読みこんでHPLCについて
理解したうえで、疑問点を再度質問したいと思います。
またよろしくお願いします。

回答No.5

noname#211914

MiJunです。
>rei00さん、
情報ありがとうございます。
回答の前にネット検索したのですが、見つかりませんでした・・・？
系列から昭和電工かと思ってましたが、メルクですか・・・？

回答No.3

noname#211914

MiJunです。

>Hitachi Gel #3013N
>rei00さん、これはShodexのＯＥＭ版でしょうか・・・？

HPLCに関しては、rei00さんも過去ログで回答されてますが、以下の参考URLサイトは参考になりますでしょうか？
「Ｓｈｏｄｅｘホームページ目次」
このサイトで「カタログデータ集」「講座」等が参考になるようです。

さらに以下の参考URLサイトには関連質問の回答がありますが、参考になりますでしょうか？
◎http://www.okweb.ne.jp/kotaeru.php3?q=28512
この中で紹介した成書を探して勉強して下さい。

参考URL：

http://www.sdk.co.jp/shodex/japanese/contents.htm

お礼

色々とありがとうございました。
教えていただいたサイト&成書を参考に自分なりに勉強して、
再度疑問点を質問しようと思います。
またよろしくお願いします。

回答No.2

rei00

ＨＰＬＣでの分離は使うカラムと溶媒によって変わってきます。で，補足要求ですが，『溶離液として、NH4Cl、KH2PO4、K2HPO4を用いました』とありますが，これらは順番に用いたのでしょうか？それとも混ぜて？

　なお，HPLC に関してはここでも様々な質問が出ています。トップページ（↓）で「HPLC」や「クロマトグラフィ－」で検索して見て下さい。お役に立つ情報もあると思います。

参考URL：

http://www.okweb.ne.jp/index.php3

補足

回答ありがとうございます。
カラムは下記にも記した通りのものを使いました。
また、溶離液は、おそらくすべて混ざっていたものとおもいます。
実験ではただ、機械にAMP,ADP,ATPの混合液をマイクロシリンジに10mlをとり、
入れただけでしたので。。。溶離液は機械中にすでに混ざっていたのではないかとおもいます。　　
また、検索の情報ありがとうございました。
検索してみます。

回答No.1

noname#211914

カラム（充填剤）はどのようなものを使用したのでしょうか・・・？

補足お願いします。

補足

早速の回答ありがとうございます
説明不足で申し訳ありませんでした。
カラムは
Hitachi Gel #3013N(スチレン-ジベニルベンゼン共重合体に第四級アンモニウウム基－CH2N－(CH3）3を導入した強塩基性陰イオン交換樹脂(pKa 13)
カラムサイズ　　径4×長さ50mm　　　カラム温度：室温
です。