遺伝子の発現解析について

質問

あるホメオボックス遺伝子（Dll）の発現を調べるために、ショウジョウバエの胚に digoxigenin で標識された Dll の cDNA プローブをハイブリダイズさせた…と論文にあったのですが、
1. digoxigenin と cDNA プローブとはどのようなものか
2. どのようにして digoxigenin を標識し、それを胚に導入するのか
について教えてください。論文には詳しいメソッドが書いてありませんでした。よろしくおねがいします。

回答No.2

geneticist12 · ベストアンサー

in situ hybridization（イン　シチュ（またはサイチュ）ハイブリダイゼイション）と呼ばれている手法です。まず、一般的なin situ ハイブリダイゼイションの原理と手法を調べて理解してください。

digoxigeninを使う、あるいはcDNAを使うというのは、本質的なことではありません。単に、選びうる手段のうちの一つです。

流れだけ簡単に言うと、
固定組織（この場合、胚）に、ラベルしたプローブ（この場合、Dll cDNAをdigoxigeninでラベルしたもの）を、ハイブリダイズさせます（サザンあるいはノーザンを想像してください）。するとプローブが組織中の相補なRNA（このばあいDll RNA）にハイブリします。これを酵素や蛍光物質などで標識した抗digoxigenin抗体を用いて組織上で検出します。

お礼

胚の中で発現している RNA にハイブリダイズさせるのですね。
ありがとうございました。

回答No.1

Sbacteria

http://www.roche-biochem.jp/products/biochemica/bionews_files/no_95/r_95_2.html
を参照してください。

あるいは、雑誌としては、
http://bookweb.kinokuniya.co.jp/htm/489706953X.html
に、RIを使わないで核酸、タンパク質に標識する方法が書いてあります。

お礼

ありがとうございます。早速参考にしてみます。