MTTアッセイ

質問

細胞毒性試験を行っていて、MTTアッセイで評価しています。
それぞれのウェルの培地をバックグランドとして、差し引いています。
MTT試薬を加えると、培地中で、細胞毒性を調べたい物質とMTTの試薬が反応して発色してしまいます。
物質の性質状ありえることはわかっているのですが、
測定できるように、なにかよい手はないでしょうか？
たとえば、ウェルにMTTの試薬を加える前にいったん培地を新しいものに置き換えるなど・・・これはいかがでしょうか？

回答No.1

TCA · ベストアンサー

> ウェルにMTTの試薬を加える前にいったん培地を新しいものに置き換える
MTT試薬添加の前に培地を交換すると、発色のためのインキュベートの間にも細胞数が殖えますが、お使いの細胞の増殖速度がものすごく速いとかでなければ、このインキュベートの時間が長すぎなければ大丈夫だと思います。
おそらく細胞数とMTT試薬の代謝物の吸光度で検量線を作製しておられると思いますが、実際、インキュベートの前の細胞数で計算されておられるのではないでしょうか。
以前に一緒に仕事をしていた人が、予めMTT試薬を必要な濃度になるよう添加した培地をつくっておき（用事調製です）、この培地に置換して発色させていました。
ご参考になりましたら幸いです。

お礼

ありがとうございました。
ぜひぜひやってみようと思います。