浮遊細胞のMTT assay

質問

浮遊細胞のMTT assayをやり始めました(HL60細胞株です)。
ある論文を参考に、細胞をまいてから24h放置し、試薬の添加を行うのですが、この24hの細胞増殖の速さが毎回まちまちで再現性のあるデータがなかなか取れず困っています。
この24h放置というのは付着細胞にしか必要ない気がするのですが、実際はどうなのでしょうか？
また、実際同じようなことを行っている方がいらっしゃれば、どのように行っているのか教えてください。

よろしくお願いします。

回答No.2

ebikichi · ベストアンサー

ＨＬ６０って細胞同士がくっつきませんか？
くっついたままだとバラツキの原因になります
９６wellのような小さなスケールでやる時は特に注意が必要です

お礼

遅くなってしまいすみません。
ご返事ありがとうございます。

細胞数を減らし、よくほぐしてから行うようにしたら安定するようになりました。

回答No.3

ureds18

最近の文献であれば、問い合わせのためのe-mailのアドレスも記載されていると思います。指導教官と連名で、authorにメールして問い合わせてみては如何ですか。ここで聞くより、早いし、細かい所も質問できると思いますよ。

お礼

遅れてすみません。
ご返事ありがとうございます。

今回はautorにメールを送ることはしませんでしたが、自分たちで解決することができました。

今後、問題が発生しましたら、メールで問い合わせることも考えていきたいと思います。
自分たちだけでは、どうしてもわからないことってありますよね。

回答No.1

MIYD

HL60でMTT assayをしている論文を参考にしていないのですか？

http://www.cmi.ustc.edu.cn/3/6/467.pdf
http://jn.nutrition.org/cgi/content/full/136/3/614

ところで、薬剤を添加していない状態で、
24hインキュベートして細胞増殖が異なるのに、
試薬を添加した時に細胞増殖への影響を見る事が出来るのですか？

お礼

ご返事ありがとうございます。
HLの文献はもちろん見ていますが、細胞をまいてから何時間後に試薬を添加したのかを記述していない論文が多いのです。そのため細胞をまいた直後に試薬添加をしたのか、それとも何時間か置いてから試薬添加をしたのか、判断しかねています。

>>ところで、薬剤を添加していない状態で、
>>24hインキュベートして細胞増殖が異なるのに、
>>試薬を添加した時に細胞増殖への影響を見る事が出来るのですか？

おっしゃるとおりで、そのために現在立ち往生しています。