組換えタンパク質の発現について初めての質問です。
組換えタンパク質の発現について初めての質問です。
現在ある遺伝子を発現ベクターに組み込んでHisタグタンパク質の発現誘導条件の検討をおこなっています。以前同様の遺伝子でGSTタグを用いて組換えタンパク質を発現することができたことから、今回25、37℃での培養を行い(IPTGの終濃度1mM,0.5mM)、超音波処理による菌体破砕後、ゲル染色、ウエスタンで確認しましたが発現しているか確認することができませんでした。
羊土社の書籍を見ながら検討していることは、(1)培養温度をもう少し低くする(20℃)、(2)超音波処理の予備実験(今まで予備実験をおこなっていないのでタンパク質が失活・変性していると考え試薬による大腸破砕を検討中)、(3)プロテアーゼ阻害剤の使用 等を考えています。
その他にどのようなことを検討すればいいかアドバイスいただけませんか？よろしくお願いします。
ちなみに発現ベクターはpQEベクターで20-30kDa付近にバンドがでると予想しています。
お礼
分かりました！！ありがとうございます！！