Th17

質問

Th17分化を細胞内サイトカイン染色で確認する実験がうまくいきません。方法はnature immunology Vol.7 937-945, 2006に則っていますが、IFN-g-FITC(+)IL-17-PE(-)が23%に比し、IFN-g-FITC(-)IL-17-PE(+)は0%と全く染色されません。

回答No.2

MIYD

使っているのはanti IL-17 antibody - PE conjugated
でいいんですよね。

抗体が反応していないのかもしれないので、
WBをして見てはいかがでしょうか。

イメージアナライザーで直接PEを検出できればいいのですが、
もしないのでしたら、2次抗体に何が使えるのかは少し考える必要があります。

お礼

ありがとうございます。話が戻って恐縮ですが、IL-17のポジコンの作り方がわかりました（EL-4をPMA/Ionomycinで刺激する）。まずこの方法で抗体がワークしているか検討したいと思います。

回答No.1

MIYD

その論文を読めませんが、
PE単独の染色では陽性細胞は検出されるのでしょうか。
ポジコンのサンプルは何を使っているのでしょうか。

お礼

早速のお返事、大変ありがとうございました。PE単独染色でも陽性細胞は検出されません。勉強不足かもしれませんが、この方法以外でIL-17を細胞内サイトカイン染色で検出する系を知らないため、このアッセイをポジコンにするつもりでした（以前同様の系で、分化後再刺激した培養上清のIL-17 ELISAではngオーダーの値がでたため）。