リン酸化タンパクの検出方法教えてください！

質問

リン酸化蛋白の検出方法に困っています。
組織抽出タンパク中のリン酸化蛋白をウエスタンで検出しようと思っています。
抗体ですとセリン・チロシン・スレオニンそれぞれの特異抗体で検出しなくてはいけないようですが、私の目的としてはいずれのリン酸化タイプでも広く検出する方法はないかと考えています。
そこで、IMAC(金属固定化アフィニティークロマトグラフィー法)を用いたリン酸化蛋白濃縮カラムと同じ原理で、リン酸基と結合するFeなどの金属イオンにHRPやAPを標識したようなものが売っていないか探しています。
知っている方がいらしたらメーカーを教えてください。
また、その他検出方法がありましたらアドバイスお願いします。

回答No.2

bzxjpjp · ベストアンサー

質問者様の希望するキットはPIERCE社からでています。

しかし、私は、条件検討が面倒くさくてあきらめてしまったのでおすすめできるかどうかですが。

参考URL：

http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=84DBB61F-9419-4061-815C-63FA11447EE2

お礼

ありがとうございます！
私の探していたものは、まさにこれです。
条件検討が面倒とのことなので、購入するかはプロトコールを読んでから考えます。
助かりました。

回答No.1

gori8063

混合抗体使うんじゃダメなんでしょうか？

お礼

やっぱりそれしかないでしょうか。
3種類の抗体を混ぜて実験は進めているんですが抗体も高価ですし、本によると抗スレオニン、抗セリンは特異性が弱いと書いてありますし。ヒスタグとニッケルNTA/HRPのように簡単に検出できないかと考えてまして。