あるタンパク質が結合する他のタンパク質の同定法

質問

生物学をかじっている者です。分子生物学の実験で、あるタンパク質の機能を調べる際、それが他のどのタンパク質と結合するのかを調べる一般的なやり方が知りたいです。
私は、Far western blotting、免疫沈降、アフィニティークロマトグラフィーといった専門用語を単語としては知っている、個々の意味を調べれば理解出来る、というレベルなのですが、そういった手法を行う具体的な順番や、どういった手法がメジャーなのかがよくわかりません。大雑把でいいので教えて頂けないでしょうか？

回答No.2

Kohntarkosz · ベストアンサー

順番は場合によって異なると思います。
最初に、酵母Two-hybridで相互作用する因子をスクリーニングし、次に、プルダウンアッセイで相互作用を検討するといった感じで行うことが多いと思います。
また、目的タンパク質が組換えタンパク質、もしくはタグ融合組換えタンパク質として得られており、nativeで認識できる抗体があるのなら、免疫共沈殿もしくは免疫アフィニティクロマトグラフィで候補因子を精製し、SDS-PAGE後、目的バンドを切り出して、LC-MS/MS等の質量分析に供するという方法もあります。
BIACOREを使う方法もありますが、機械がないとできないので一般的ではありません。

お礼

ありがとうございます。
大変参考になりました。

回答No.1

dolphino

一般的、というのは難しいですね。
それぞれに装置も必要なので、自分が置かれた環境で使えるものを選びます。お金があれば装置を買ったり、専用キットを買ったり。共同研究者を探したり施設内の共同利用器機に必要なものがあるか探したり。

得意な技術を基本に敷居の低いものを選びます。例えばYeast Two Hybridであれば遺伝子操作ですが、SPRであればタンパク精製が必要でしょう。

具体的な方法は学術論文や商品のカタログなどを参考にします。Bio-RadやGEヘルスケアバイオサイエンスなど、他にもいろいろあります。