プライマーについて

質問

現在実験でPCRを行っています。当然プライマーを使用しています。プライマーは業者に注文したもので、初め使用する時に滅菌水に溶かしました。普段プライマーは－２０℃で冷凍保存していますが、プライマーはどのくらいの期間保存できるでしょうか？
また、プライマー自体が壊れていないかを調べる手段などはあるのでしょうか？
もしよろしければ教えていただきたいとおもいます。

回答No.1

geneticist12 · ベストアンサー

１．凍結再融解を避ける
２．濃度を高くする
３．TEなどのバッファー中で保存する
をしておけば、半永久的に保存できます。
濃度を高くしておくことで、極性を持つ水分子のアタックによる分解を防ぎ、バッファーに溶かすことで、核酸自身によって酸性に傾き酸によって分解するのを防ぎます。

凍結再融解を最小限にするには、小分けするのが良いです。でも、小分けのチューブがたくさんあっても管理が大変なので、私は、高濃度（100 uM）のTE溶液を長期保存用のストックとして、当座使う分だけ（実験の頻度によって、20 uLから200 uLくらいの範囲で）使用する濃度（10 uM)に純水またはTEで希釈して、それぞれ凍結保存します。

PAGEやHPLCで、プライマーの品質を調べたり精製することができます。ただのPCRに使うだけならそこまでやらなくても問題ないですが、特に精度が求められる場合には、やりかたを調べて試してみてください。