アフィニティカラムクロマトのバッファ調整について

質問

大学で、ＤＮＡアフィニティカラムクロマトグラフィーによる組み替えＤＮＡpolβの精製を行うのですが、その際に使用する緩衝液を作成する方法を考えています。
　しかしどうやって、モル表記の試薬からｍｌ単位でバッファを作成するのが、わかりません。塩酸をモル濃度で調整するように、物質量などから計算する物なのでしょうか？
　問題の一例としては『５×Buffer A(DTTは含まない）,２M KCl,1M DTTよりBuffer A（50mM Tris-HCl ph7.6,0.1mM EDTA,1mM DTT,10%glycerol)15mlを作成せよ』というものです。
　基礎的な質問だとは思いますが、どうぞ宜しくお願い致します。

回答No.2

blackdragon · ベストアンサー

濃い濃度の原液を組み合わせて薄い濃度のバッファーを作る方法がわからないということでしょうか？

でしたら、原液のモル濃度が出ていますよね？

ということは、何倍に希釈すれば目的の濃度になりますか？

たとえば、1M DTTを使って1mM DTTを15ml作るなら、
1mM / 1M = 1/1000
ですから、15mlの最終溶液に対して、その1/1000の15μlを使えばいいことになります。
（必要な量ずつ入れて、最後に水でメスアップする）

５Xというのは、５倍濃度ということでしょうから、当然、最終溶液の量の1/5量使えばいいですね。この場合は、
5*1/15で、3mlになりますね。

お礼

ありがとうございました。大変参考になりました。

回答No.1

yuyu2003

＞モル表記の試薬からｍｌ単位でバッファを作成する
濃い溶液から薄い溶液を少量で調製したいということでしょうか？
もしそうでしたら希釈を数回に分けて行ってください。たとえば、
1M 100uLを1mLに希釈すれば100mM、
100mM 100uLを10mLに希釈すれば1mMです。

お礼

ありがとうございました。大変参考になりました。