試薬のつくりかたについて

質問

0.1M Kcl,1mM Mgcl2,10mM phosphatebufferpH6.8という試薬をつくりたいのですが、混合比などをどうしたらいいのかわかりません。
どなたか教えてください！
知識がまったくないので・・・お願いします。

回答No.3

naomi2002 · ベストアンサー

＞プロトコールに「0.1M KCl,1mM Mgcl2,10mM phosphate buffer pH6.8を入れたシャーレの中で作業を行なう」とあるのですが

ごめんなさい。ご質問の意味を勘違いしていました。m(__)m

KCl、MgCl2、phosphate bufferという3種類の液ではなくて、全部あわせて1種類の液なんですね。
No.2の補足を拝見して気がつきました。

この場合は各成分のストック液を稀釈して作ります。
KClとMgCl2はすでにストック液があるので、これを使います。

以下、調製したい液の量を1Lとして説明します。

KClストック液は×20なので、1Lの液を調製したい場合には、その1/20、つまり50mLを使います。

MgCl2はストック液が×10なので、1Lの液を調製したい場合には、その1/10、つまり100mLを使います。

phosphate bufferもNo.2に書いたものの10倍の濃度（100mM）にしておいて、最終容量（1L）の1/10、つまり100mLを使います。

ここまでで、合計250mLですね。
あと750mLは水を加えて稀釈します。
これで各成分が所定の濃度になっているはずです。

10×phospate bufferは、次のように作ります。

100mM NaH2PO4・2H2O　（これをA液とします）
100mM Na2HPO4・12H2O　（これをB液とします）
を作ります。
A液は、NaH2PO4・2H2O　15.6gを水に溶かして1Literにする。　
B液は、Na2HPO4・12H2O 35.8gを水に溶かして1literにする。

AとBを、体積比1:0.389になるように混合すれば、pH6.8になるはずです。
実際には、どちらかを始めは少なめにしておいて、pHメーターでpHを見ながら調整します。
例えば、A液を1Literに対し、B液を0.3Literくらい混ぜておきます。
pHメーターでpHを見ながら、これにB液を少しずつ加えていきます。
もちろん、攪拌し続けながらです。
そして、pH6.8になったら、B液を加えるのを止めます。

今度は間違いないと思います。
先ほどは間違えてしまって、ごめんなさい。m(__)m
また何かあったら、補足してください。

お礼

理解できました（*^_^*）ありがとうございます。
とても丁寧に説明していただいて助かりました。
これで調整できそうです。

回答No.2

naomi2002

補足拝見しました。

KClは2Mのストック液があるんですね。
これを0.1Mにするのは、20倍に稀釈すればできます。
ストック液と水を、体積比1:19で混合してください。

MgCl2も同様、稀釈するだけです。
ストック液が100mMですね。
これを10mMにするには、10倍に稀釈すればいいはずです。
ストック液と水を体積比1:9に混合してください。

phosphate buffer（リン酸緩衝液）ですが・・・
まず、
10mM NaH2PO4・2H2O　（これをA液とします）
10mM Na2HPO4・12H2O　（これをB液とします）
を作ります。
A液は、NaH2PO4・2H2O　1.56gを水に溶かして1Literにする。　
B液は、Na2HPO4・12H2O 3.58gを水に溶かして1literにする。

いま計算してみたら、AとBを、体積比1:0.389になるように混合すれば、pH6.8になるようです。
実際には、どちらかを始めは少なめにしておいて、pHメーターでpHを見ながら調整します。
例えば、A液を1Literに対し、B液を0.3Literくらい混ぜておきます。
pHメーターでpHを見ながら、これにB液を少しずつ加えていきます。
もちろん、攪拌し続けながらです。
そして、pH6.8になったら、B液を加えるのを止めます。

難しいことは省略しますが、簡単に言えば、Aが酸でBがアルカリだと思ってください。
どちらもリン酸濃度は10mMなので、どんな比率で混ぜても、混合液のリン酸濃度は10mMで変わりません。しかし、混合比によってpHは変わります。
Bが多くなるほど、pHは高くなるはずです。

これで間違ってないと思います。
とりあえず、やってみてください。
もし何か問題があったら、また補足質問してくださいね。

補足

ありがとうございます。
結局この溶液中で筋肉の小片をほぐす作業を行なうのですが、プロトコールに「0.1M KCl,1mM Mgcl2,10mM phosphate buffer pH6.8を入れたシャーレの中で作業を行なう」とあるのですが、調整した試薬をどのような割合でシャーレに入れればよいのでしょうか？
濃度が違う試薬を混合したら濃度は変化しないんでしょうか？
度々すみませんがよろしくお願いします。

回答No.1

naomi2002

今そちらにどんな試薬があるか、教えてください。
それによって、調製の仕方が違いますので。

塩化マグネシウムのボトルのラベルを見てください。

MgCl2（無水）と書いてありますか？
それともMgCl2・12H2O（12水和物）と書いてありますか？

Phosphate buffer（リン酸緩衝液）は、2種類のリン酸塩（NaH2PO4とNa2HPO4）を混合して調整します。
その混合比率によってpHが変わります。
普通はNaH2PO4もNa2HPO4も、結晶水が付いていて、
NaH2PO4・2H2O
Na2HPO4・12H2O
となっています。
いま実験室にある試薬のラベルを見てください。
たぶん、2H2O、12H2Oが付いていると思いますが、もしそうでない場合は計算の仕方が違ってきますので、一応確かめてください。

0.1M KClは特に問題はありません。
水1Liter あたり、KCl 75.55 gを加えて攪拌するだけです。

補足

既にストックされているものを使用することになりました。
ちなみにストックは
2MのKCl
100mMの塩化マグネシウム
リン酸緩衝液は作らなければなりません。
2H20,12H2Oがついています。

各試薬の作り方はなんとなくわかるのですが、これをどのように混合したらよいのでしょうか・・・。
全くわからずです。

よろしくお願いします。