検量線の作成について

質問

こんにちは、検量線について質問させていただきます。

現在Troloxを用いて検量線を作成し、その検量線を用いて
サンプルのTrolox相当量を出す実験をしています。
Troloxを0（ブランク）,25,50,75,100,125umolで調製し、
他の試薬と反応後に吸光度を測定しています。
測定値を平均して（n=3のため）、その値をプロットして
エクセルで検量線を引く、という方法でやっています。

このとき、ブランクの0mmolは検量線に加えない
（プロットしない）で25umolから引くものなのでしょうか？
また、ブランクの値を各サンプルの値から除く（ひく）ということを
聞いたのですが、この実験の場合ブランクが最も吸光度が大きいため
除く、ということをするとマイナスになってしまいます。
この場合、どのような方法で検量線を作成するのが正しいのでしょうか？

分析化学に関する良い本をなかなか探せずに困っています。
（検量線の引き方についても、正直知識があやふやです。。。）
もしおすすめの本などもございましたら、教えていただきたいです。
どうぞよろしくお願いします。

回答No.2

trytobe · ベストアンサー

追記になりますが、

「ブランクの値を引く」というのは、「そもそも単純に足し引きしてよい理由でブランクに数値が出ているのか」にもよるので、安易に引き算せずにそのままプロットしたほうが、後日にいくらでも簡略化するためのデータが残せます。

同じ濃度３測定のデータを列挙する場合は、表計算ソフトの Excel などでは、「濃度」の列にブランクなら「０」を３行入力して、その右の列「測定値」の列に３回のそれぞれの測定値を入力して、合計６水準×３回測定＝１８測定の１８行・２列のデータに対して、「散布図」というグラフ形式でプロットさせます。

「散布図」を選ぶと、左の列が横軸、右の列が縦軸、で点を打ってくれますので、あとは近似直線（近似曲線）をプロパティから選択して、パソコンに勝手に最小二乗法で一番近似できている（Rの2乗、R^2 が一番 １ に近くなる）線を引いてもらって、その式を表示させます。

ご質問の場合は、切片は０にすると R^2 が１ から離れて小さくなるかと思いますし、変に凝った曲線を使うよりは、直線で近似するほうが「吸光度」の理論からすると良いと思います。

お礼

とてもわかりやすく説明していただき有難うございます！
助かりました！

回答No.1

trytobe

実際の測定値から濃度を逆算するためのものですから、事実に即して、切片がマイナスになったとしても、そのままプロットして、最小二乗法で一番近似した直線などを引いて用います。

ですから、ご質問の場合のブランクもプロットしてそれにも近似させなければなりませんし、測定３回を平均せずに、各濃度での測定値３点ずつのまま、６濃度条件の１８点に対しての近似を行わなければなりません。

補足

標品各濃度の値からブランクの値を引かなくてもよく、ブランクのプロットも含めて検量線をひくということでしょうか？
また、18点で検量線をひくにはexcelにどのように入力したらよいでしょうか、質問だらけで申し訳ございません。。。