ベストアンサー 分光光度計について 2001/06/01 11:02 分光光度計の取り扱いで、0.1~0.8nmの値内でしか正確に計測できないのは何故なのでしょうか? できればLambert-beerの法則に関係づけて回答をおねがいします。 みんなの回答 (6) 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー inorganicchemist ベストアンサー率34% (88/257) 2001/06/01 13:20 回答No.5 ランバートベールの式に関連づけてということですので。 Abs=e c l のほかに Abs= -logT= -log(I/I0)という式がありますよね。 この式をみると、たとえばAbs=3とは、入射光の1/1000 の強度が検出されたということになります。 この強度を検出する際に当然、誤差があります。 仮に、一つの検出器で入射光と透過光を同時に検出するなら、 その検出器は1~1000のはんいで精密に検出が可能でないと いけません。それよりはAbs~2程度になるように 溶液を調整した方が好ましいのだと思われます。 私が使っている分光器はAbs(MAX)が5まで設定できますが、 イプシロンが必要なときはAbs~2以下になるようにしています。 質問者 お礼 2001/06/01 22:07 みなさん返答をありがとうございました。 どうにかレポートも間に合いました。 またおねがいしますね。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 その他の回答 (5) 38endoh ベストアンサー率53% (264/494) 2001/06/01 13:37 回答No.6 L.-Beerの式より、吸光度Absと、入射光強度I0と、透過光強度Iとの関係は、以下の通りです。 Abs = -log(I/I0) すなわち、吸光度は、透過率I/I0の常用対数の逆数となります。よって、試料がAbs=1のときは透過率10%、Abs=2は1%透過、Abs=3は0.1%透過…、という具合になります。なお、ホトマルの検出感度はこの透過率の有効数字に支配されますので、吸光度の有効数字が0 < Abs < 1でn桁あった場合、1 < Abs < 2では有効桁数n-1桁、2 < Abs < 3では有効桁数n-2桁…、という具合に精度が悪くなります。 質問者 お礼 2001/06/01 22:07 みなさん返答をありがとうございました。 どうにかレポートも間に合いました。 またおねがいしますね。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 noname#53364 2001/06/01 13:15 回答No.4 >できればLambert-beerの法則に関係づけて回答をおねがいします。 こうかかれるとレポート?と思ってしまうので考えものですが、Lambert-beerの法則の成立する条件に希薄溶液ではとありませんか?濃い溶液ではどうなるのでしょう。濃い溶液は吸光度も大きくなリますよね。薄いほうはご自分で機械を使うとわかると思いますが、値のぶれがこれ結構大きいので、あんまり薄いのもやはりだめ。あとは皆さんがかかれているとおり、機械の光源の安定せいを考えればそんな値になるでしょう。あとは検量線と相談になります。 あくまでもあの値は目安です。実際の実験では許される誤差などもかかわってきますので気をつけましょう。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 1 rei00 ベストアンサー率50% (1133/2260) 2001/06/01 11:58 回答No.3 rei00 です。 atching さんの回答を拝見しましたので,追加しておきます。 お使いの分光光度計の吸光度の測定可能な最大強度は 1.0 ではないですか。以前の分光光度計は殆どの物がそうでした。 この場合,測定可能範囲ギリギリでは正確な測定が出来ない,あまり微量でも正確な測定が出来ない,という事で 0.1 ~ 0.8 の範囲にしなさい,という習慣じゃないでしょうか。 ですから,最大 2.0 まで測定できる分光光度計であれば 1.?? まで十分正確に測定できます。 質問者 お礼 2001/06/01 22:06 みなさん返答をありがとうございました。 どうにかレポートも間に合いました。 またおねがいしますね。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 atching ベストアンサー率17% (21/118) 2001/06/01 11:49 回答No.2 勘違いされているかと思いますが、吸光度が0.1~0.8ではないでしょうか?0.1~0.8nmの波長は読めませんよ。すべての場合でその間がふさわしいとは限りません。きちんと検量線をとって直線に乗っているかどうかを確認してから、使用できる範囲を決めるのです。吸光度は透過率の対数ですから、それ以外の範囲では誤差が大きくなることが多いからでしょう。あくまで0.1-0.8は一般論です。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 rei00 ベストアンサー率50% (1133/2260) 2001/06/01 11:47 回答No.1 お書きの 0.1 ~ 0.8 nm というのは何の数値でしょうか。 推測すれば,吸光度の事かと思いますが,それでしたら nm という単位ではありません。 nm で表示するのは波長ですが,どの様な分光光度計でも測定波長が 0.1 nm ~ 0.8 nm という事はありません。 この点について補足下さい。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学化学 関連するQ&A 分光光度計について 分光光度計についての質問なのですが、本を見ていると波長520nmの場合、吸光度0.5以上の値は信頼性がない、という記述がありました。 これはなぜなのでしょうか? いろいろ調べてみたのですがよく分かりません。 吸光度が大きいと透過光の強度が弱く測定誤差が大きくなるのが関係するのかなとも思うのですが・・・。(それなら波長は関係ないとも思ってしまいます) どなたか分かる方、ご教授願えれば幸いです。 分光光度計と蛍光分光光度計 「蛍光」の方で、励起光で、励起状態にした後の蛍光強度の測定というのは、分光光度計で同じ波長のODを測るのと同じ理屈でしょうか? 質問が、的を得ないですみません。 例えば、ある蛍光試薬の、蛍光波長が547nmだとして、励起 後の蛍光強度は、分光光度計で測定したODと同じはずなんでしょうか? 質問の内容が不明な部分は、補足いただくと助かります。 どうぞよろしくお願いします。 分光光度計を使った実験で… 分光光度計を使った実験で、ちょっと困ったことが。 溶液をセルに入れて分光光度計で測るのですが、溶液の温度を低くしているためセルに曇りができて、正確な吸光度が測れません。 溶液を低温に保ったままでセルに曇りができるのを防ぐには、どうしたらいいでしょうか。 天文学のお話。日本ではどのように考えられていた? OKWAVE コラム 分光光度計に付きまして こんにちは 某鉄鋼メーカーに勤めております 40代 男です 鉄鋼の酸洗に使用しております硫酸に入れる添加剤の濃度測定に、某薬品メーカーより分光光度計の使用を紹介されました。 具体的には、硫酸に、ある薬液を滴下していき、630nmのフィルターを使用して吸光光度計で測定し、吸光度60%となった滴下量を終点とします そしてその滴下量を検量線に当てはめて硫酸に添加した薬液の濃度を出してやるのですが、その際、検量線作成に使用した、分光光度計と測定に使用する分光光度計が違っても問題ないでしょうか? それとも測定に使用する吸光光度計で検量線を作成しないとダメでしょうか? こういう機器の付いては素人でしてよく分かっておりません 何方か教えていただけませんか? 分光光度計・吸光度とは? ある液体の濃度測定をお願いしたところ、「分光光度計にて595nmにおける吸光度を測定する」と言われました。僕にはさっぱり意味が分からず、結果の数値を見ても人に説明できません。で、分光光度計とは?吸光度とは何でしょうか?何を測定したのでしょうか?まったくの無知なもので、よろしくお願いします。 分光光度計の波長変更 T-Pを分光光度計、波長710nmで測定しています。講師から波長を880nmに変更するとの指示がありました。 これって、本当に問題ないのでしょうか? そもそも、なぜ710nmなのでしょうか? 750nmでも800nmでは 何か問題があるのでしょうか? 教えてください。 分光光度計の波長の意味について。 実験で、分光光度計を用いて、クロロフィルとアントシアンを測っています。 クロロフィルを測る際に、「750nm」「663.8nm」「646.8nm」の波長で測っているのですが、なぜ、この3つの波長で測るのでしょうか? また、この波長で測ることによって、何がわかるのでしょうか? アントシアンを測る際には、「530nm」の波長で測ります。 なぜこの波長なのでしょうか?この波長で何がわかるのでしょうか? とても困っているので、お願いします。 分光光度計によるRNA濃度定量 RT-PCRをするためtRNAを抽出してサンプルを作製し、そのRNA濃度定量のため分光光度計を使用しています。スペクトル計測していますが山のピークが260nmでなく270nmくらいになってしまいます。原因として何が考えられるのでしょうか。なおRNA抽出はTRIzolで租抽出し(3層分離まで)その水層をスピンカラムにとおしてtRNA抽出しています。 分光光度計のスリット幅について(教えて) 分光光度計の購入を検討しています。以下の点が分からないのでどなたかご教授ください。 1)いろいろなメーカーのカタログを見ると、スリット幅2nm、バンド幅2nm、分解能2nmという言葉が出来てますがこれらは全て同じでしょうか? 2)スペクトルバンド幅1nmの機器と1.5nmの機器では測定にどのような違いが見られるのでしょうか? よろしくお願いします。 濁度は分光光度計?吸光度計? ご存知の方、教えてください!! よろしくお願いします! 濁度は、分光光度計または吸光度計、どちらでも測定できるようですが、 どちらで行うのが正しいというのはあるのでしょうか? また、何か別のフィルターが必要などということはあるのでしょうか? 測りたい試料は培養液中の菌体の濁度です。 菌体の場合、分光光度計でも吸光度計でも波長は600nm前後を使用するのが一般的のようですが、 なぜ600nm前後の波長なのでしょうか? どんな理由があるのでしょうか? 調べてみたのですが、基本的な事過ぎるのか、もう周知の事実なのか、 理由までは探せませんでした。 実際に培養液の吸光度を(誤って…)405nmで測定して、菌数をセルカウントで測定、 その結果をもって検量線を引いてみたのですが、R^2も0.94ぐらいで、まあまあよさそうなのですが、 やはり600nm前後の方が良いのでしょうか? 測定は620nmでやり直すつもりですが、なぜ600nm前後がいいのか理由が知りたく、こちらで質問させていただきました。 よろしくお願いします! 分光光度計の吸光度の値について。 分光光度計で吸光度を測定する実験をしました。 ゼロは水であわせ、測定するサンプルは試薬の混ざった水です。 それなのに、結果がマイナスの値になってしまいました。 何が原因でしょうか? また、吸光度はどういったときに、マイナスを取るのかを教えてください。 よろしくお願いします。 原子吸光分光光度計を使って正確に測定するには? 原子吸光分光光度計を使ってミネラル測定をしています。同サンプルを測定日を変えて分析するとppbオーダーで2桁ほどのずれを生じるためどれが正しい値なのか分かりません。どうしたら正確に測定できますか? 日本史の転換点?:赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム (蛍光分光光度計)励起波長の設定について (蛍光分光光度計)励起波長の設定について こんにちは、私は最近化学発光について研究をし始めた学生です。 先日、蛍光分光光度計を用いて化学発光のスペクトル測定をしていたのですが、その途中で疑問が1つ生じましたので投稿させていただきました。 励起波長を340nmと設定した場合、スペクトルは全く確認できず、ノイズのみのデータしか得られませんでした。 しかし、この励起波長を変化させているうちに、励起波長を750nmと設定した場合、明確なスペクトルが370nm辺りに確認できました。 なぜ750nmでスペクトルが確認できたのか、その理由が分かりません。 一応、750nmの励起波長を持つものはどこにも存在しない、と言う事だけは分かるんですが…。 ですので、ご存知の方に解説を頂けたらと思います。 蛍光分光光度計の測定条件は以下の通りです。 FP-6500 Xeランプ バンド幅:5nm 励起波長:750nm(340nm) 開始波長:360nm 終了波長:600nm 走査速度:200nm/min スペクトル測定に使用した試料は ルシフェリン-ルシフェラーゼ混合溶液(Mg入り) 蒸留水 ATP溶液 終濃度 5mM です。 よろしくお願いします。 分光光度計の使い方について 初めてokwaveを利用させていただきます。宜しくお願い致します。 私は大学3年生で、今年の夏休み明けから生物系の研究室に配属になり、実験の基礎を学んでいます。 そこで、現在は大腸菌を大量培養する際にOD600値の測定をする為に分光光度計を使っているのですが、分光光度計の使い方に不安があり、質問させていただきました。 私が学んだのは、「培養液のみの入ったキュベット(ブランク)をリファレンス側とサンプル側にセットし、オートゼロ(ゼロ補正)を行った後、サンプル側のキュベットを大腸菌入り培養液のキュベットに変え、OD値を測定する」という方法でした。 しかし、いざやってみると、培養時間に対してOD値の上がり方が不安定でした。 具体的に申しますと、培養時間に対してOD値が指数関数的に上昇せず、挙げ句の果てには時にOD値が下がってしまうこともありました。 なんかおかしいなと思い、先のオートゼロの際に使った「培養液のみ入ったキュベット」を再びセットしてみると、OD値がゼロにならず、±0.1ほどずれてしまいます。 もっとおかしなことに、同じ大腸菌入り培養液を複数回測定するとOD値が0.2ほど異なる値が出てしまい、要するに全く再現性が取れていません。 インターネットで調べてみると、オートゼロの際にはリファレンス側にもサンプル側にも蒸留水を入れるなどといった記述もあり、混乱しております。 また、私が習った方法では、キュベットを3本使用するのですが、そもそもそれもおかしな話だなと感じています。サンプル側にセットするキュベットを変えてしまっては、セル自体の誤差が出てしまいます。 そこでお訊きしたいのが、そもそも私の分光光度計の使い方が全く検討はずれなのでしょうか。 ご教授いただけると嬉しいです。 分光光度計の使い方につきご教示ください 医学系大学院生です。 分光光度計を用いて、ある反応における経時的な補酵素の減少(NADPH→NADP+)を測定しようとしていますが、上手く結果がでません。 機器はPerkin Lambda 950, 石英セル×2に蒸留水を入れ、オートゼロ →反応に必要な成分を混合したsampleを測定用のセルに入れ測定(340nmにおいて、20秒ごと30分) 期待しているような経時的な綺麗な減少ではなく、up downの激しい結果となってしまいます。 非常に初歩的な質問で恐縮ですが、改善点につきご教授頂けますと幸いです。 宜しくお願いいたします。 分光光度計の検量線が直線にならず困っています 分光光度計を用いてI3-(triiodide ion)の濃度決定を行うために、λ=353 nmにて検量線の作成をしています。 ところが、直線性の良い検量線が得られません。 濃度が高い所で検量線が寝るような現象は良くあると思うのですが、 私の場合は濃度が高いほど起き上がる形になっています。 Excelにて近似曲線を作成したところ、2次式が良く適合しR2=0.9998でした。 何度調製してもこのようになりますし、どの濃度でも近似曲線に良くのるのでこれを検量線として使おうかと思っています。 以下について教えて下さい。 ◇濃度が高いほど検量線が起き上がるというのはありえるのでしょうか? ◇おかしいならば、何が原因と考えられるでしょうか? よろしくお願いいたします。 Lambertの法則、Beerの法則及びLambert-Beerの法則 Lambertの法則、Beerの法則及びLambert-Beerの法則の相互関係についてまとめよ。 という課題を出されたのですが、Lambertの法則が調べても全然出てこなくて困ってます。 どういった法則なのでしょうか? もしよかったら、課題についても教えていただきたいです。 分光光度計の精度確認につきまして 某 2次加工メーカーに勤めております 40代男です 最近、薬品の濃度測定に分光光度計を使用する様になりまして、この機器の取扱いに付きまして、教えて頂きたい事があります 教えて頂きたいのは、精度確認、校正の方法でして、自分なりに調べて見ますと、使用するフィルターを外部校正して頂く必要がある様です こちらの方、フィルターの校正だけで問題ないでしょうか? こういう機器は使用するのは初めてでして、何方かご存知な方がいれば、教えて頂きたののですが 分光光度計から物質含量率を求める方法 サンプルに含まれる物質含量を計測するのに分光光度計を用いました。 吸光度と該当物質の検量線を求めたのですが、その回帰式に吸光度を代入して濃度を求めた数値が、含有率なのでしょうか? サンプルを溶かした溶媒や物質の質量も用いて求めるものなのでしょうか。。。 基本的なことだと思うのですが、まったくわかりません。 とても恥ずかしいことなのでしょうが、どうか教えてください。ずっとわからなくて困っています。 Lambert-Beerの法則についてお聞きしたいのですが・・・ Lambert-Beerの法則についてお聞きしたいのですが・・・ Beerの法則はA=kc、Lambert-Beerの法則ではA=?clと表わされていました。 Lambert-Beerの法則のcはmol/lですがBeerの法則は濃度cと書いてあるだけで単位が分かりません。 レポートを明日までに下書きしたいので早めの回答お願いします。 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば? Part2 結婚について考えていない大学生の彼氏について 関東の方に聞きたいです 大阪万博について 駅の清涼飲料水自販機 不倫の慰謝料の請求について 新型コロナウイルスがもたらした功績について教えて 旧姓を使う理由。 回復メディアの保存方法 好きな人を諦める方法 小諸市(長野県)在住でスキーやスノボをする方の用具 カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科(小学校・中学校)化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他(自然科学) カテゴリ一覧を見る OKWAVE コラム 突然のトラブル?プリンター・メール・LINE編 携帯料金を賢く見直す!格安SIMと端末選びのポイントは? 友達って必要?友情って何だろう 大震災時の現実とは?私たちができる備え 「結婚相談所は恥ずかしい」は時代遅れ!負け組の誤解と出会いの掴み方 あなたにピッタリな商品が見つかる! OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
お礼
みなさん返答をありがとうございました。 どうにかレポートも間に合いました。 またおねがいしますね。