繊維芽細胞の接着性

質問

薬大で研究している学生です。

今回、48wellプレートに正常ヒト肺線維芽細胞を3.0×10^4になるように播き、18時間後に、PBSで3回wellを洗浄したところ、細胞がほとんど剥がれてしまいました。

考えられる原因として、
(1)細胞がまだ張り付いていなかった。
→見た感じ張り付いていると思ったのですが、18時間では張り付かないのでしょうか？それとも、トリプシン処理のところで、トリプシンが効きすぎて、細胞接着が上手くいかなかったのでしょうか？(トリプシンはインキュベーター内に3分間静置）

(2)繊維芽細胞は、コラーゲンなどの細胞外マトリックスでコートされたwellプレートでないと張り付きにくいのでしょうか？

それとも私の腕が悪いからでしょうか？？(>_<)行き詰ってしまったので、どなたか、繊維芽細胞を扱った経験がある方がいましたらよろしくお願い致します。

回答No.1

browntraut · ベストアンサー

細胞接着にはカルシウム、マグネシウムなどの２価カチオンイオンが必要です。

PBSはPBS(+)でない限り、これらのイオンが含まれていません。

必要以上にPBSで洗うと接着があまくなり、また、そのような状態でPBSビームを細胞に直撃させると細胞は剥がれやすくなります。

線維芽細胞は接着が良いタイプの細胞ですが、今度は各ステップごとに顕微鏡で確認しながら作業することをお勧めします。

以上を試して、どうしてもダメなとき・・・
PBSで洗う作業は少ない方が良いですが、どうしても洗わなければいけないのであれば、Ca、Mgを培地に含まれている濃度添加してやると改善します。

18時間で接着するし、トリプシン3分も逆に短すぎるくらいですが剥がれれば問題ありません。

プレートも普通の培養細胞用で問題ありません。

細胞が悪いってことも考えらえますが、それ以前も普通に飼えていたのであれば問題ないと思います。

最期に確認ですが、培地には血清は含まれていますよね？

お礼

お礼が遅くなって申し訳ありません。

詳しくありがとうございます。本当に助かりました。アドバイスどうり色々試して頑張ってみます！！

今後ともよろしくお願い致します。

補足

はい！血清は含まれています！