現在、遠心分離により、細胞内画分分けを行っています。

質問

現在、遠心分離により、細胞内画分分けを行っています。
　私が欲しい画分はミクロソーム画分です。しかし、ミクロソーム画分のマーカーとしてPDIを用いると核画分にPDIのバンドが現れてしまい、ミクロソーム画分にはPDIのバンドが現れませんでした。
　おそらく、核から小胞体が剥がれていなく1000×g,10minの遠心分離の際に核と一緒に小胞体も落ちてきてしまっていると考えられます。
どなたか核と小胞体を解離させるアドバイスを頂きたいです。
　よろしくお願いします。

回答No.1

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核画分にPDIが混入していることよりも、
ミクロソーム画分にPDIがないことが問題ですね。
核画分には、未破砕の細胞なども混入しますから。

核から小胞体が離れないというのがよくわかりません。
小胞体は細胞質に網状に存在するオルガネラで、
核のそばに密集しているわけではないので。

細胞の破砕に問題はないですか？
ホモジナイザーできちんとホモジナイズされているか、
確認したほうがいいと思います。

あと、PDIだけでは怪しいので、他の蛋白の抗体も
使ってみてはいかがでしょうか。