HPLCの保持時間が遅くなります。

質問

HPLCの保持時間が遅くなります。
校正をしようと校正専用のODSカラムにて測定しているんですが、
繰り返し測定するにつれ、徐々に保持時間が遅くなり、面積も大きくなります。保持時間が早くなるならカラムの劣化も考えられるのですが…また、移動相（アセトニトリル：水＝４：１）もポンプが１台しかないので事前に混合してます。メーカーサポートに電話でアドバイスしてもらったのですが、保持時間が早くなる現象は聞いたことあるんですが…とのこと。一応、送液ポンプのバルブ洗浄をIPAで行ってみたのですが、症状は改善されず。移動相も十分に流しても改善されず。ポンプ圧も一定している状況です。
HPLCは使用頻度が少ないので、久々に動かしたら…こんな症状です。
どなたか、アドバイスいただけると色々試せるんんですが。ご存知の方お願いします。

回答No.3

km1939 · ベストアンサー

N0.2です再回答します。

　質問：カラム洗浄に従来の移動相以外のものがないか。

　　　　カラムメーカに聞くのが早道です。

　　　　私の経験では、アセトンを使いました、流量は従来の1/5くらいです。

お礼

お礼が遅くなり申し訳ありません。
他業務が忙しくなかなかHPLCにかかりきりに
なれず…
移動相を一昼夜流しっぱなしにしたら…
リテンションタイムは回復したものの
今度は一転。だんだん早くなり…
カラム劣化なら徐々にだと思いますが、繰り返し
打つごとにで自分でもどうしていいのやら
困り中です。
ちなみに、流量をカラムありとなしで測定
しましたが、表示通りの流量はでてました…
ちょっとお手上げ状態です。

ちなみにカラムメーカは関連会社製なので
すぐに聞けるとは思いますが、もうちょっと
なんとかしてからにしようかと思案中です。

回答No.2

km1939

Ｎｏ１さんの１～３までを確認しても異常なければ、廃液の量を計って、流量変化の有無を確認
　して下さい。
　異常なければ、一昼夜位カラム洗浄をした見てください。

お礼

アドバイスありがとうございます。
流量を測定して、異常がなければ
カラム洗浄を一昼夜。ですね。
そうなった場合、移動層にアセトニトリルと
水の混合溶液を使用していますが、これで
ないとだめでしょうか。
アセトニトリルは貴重でして・・・

回答No.1

ryokei14

１．プレッシャー値が高くなってませんか？　
　　インジェクションする液のろ過が不十分かも。

２．相互作用の強い検体を分析にかけた後ではありませんか？
　　両親媒性物質やキレートを作るリガンドとなる有機物など。

３．予備カラムに替えてみて、症状をみてください。

何をかけているのか書いてあると、もっと見ている人がアドバイスしやすいとおもいますが・・・

お礼

アドバイスありがとうございます。
圧力は、高くありません。（ODSカラムφ4.6×250mmカラムの使用で圧力は6～7MPa）
また、分析にかけようとしているのはアクリジンです。
（溶解はアセニトのみ）
そして、最初カラム劣化を疑って別のカラムに交換してみましたが
同じような現象となり、カラムではなく装置側に起因するものと
考えています。

また、本条件で毎回校正をしていますが、稼働率があったことは
問題なくできていたようです。