ファージの保存について

質問

ｃDNAライブラリーを作りました。
このパッケージング産物（ファージ）の保存について質問です。

タイターチェックを行ったのですがしばらく使う予定がなかったので-80℃で保存していました。今は解凍してまたタイターチェックするところです。

この解凍したファージは4度でおいていますが、何℃でどのくらいの期間もつのでしょうか。
そして長期保存したい場合はどうすればいいのでしょうか。

自分が使っているマニュアルには書いてなくて、調べても長期保存のことは書かれていないので、どうか教えてください。

再度ｃDNAライブラリーを作るのは予算や材料から難しいのですが、何度もまた長期にかかってスクリーニングするかもしれないんです。
どうかお願いしますm(__)m

回答No.1

geneticist12 · ベストアンサー

長期保存するなら、amplifyしてからがいいでしょう。
全量または十分なタイターのライブラリーをプレーティングして培養後、SMを注いで溶出したファージを回収します。

クロロフォルムを垂らして密閉しておけば、冷蔵庫で数年持ちます。ただし、タイターは一年で一桁くらい下がってきます。

冷凍保存はしたことはないのですが、いかに凍結保存液を工夫したところで、オリジナルのタイターを保ったまま、凍結、解凍するのは不可能でしょう。やはり、amplifyしてからのほうがいいでしょうね。

libraryというのは、総タイターとクローンの多様性（一個一個のファージが独立なインサート分子を含んでいること）が重要です。その意味では、作りたてののライブラリーをamplifyしないで使うのが理想的です。

保存によって、どうしてもタイターの低下、それに伴うクローンの多様性の低下が起こってしまいます。そこでamplifyをして、1個のクローンに由来する多数のファージを作っておきます。冗長性を持たせることで、タイターが低下しても、クローンの多様性が保たれようにします。いくらタイターが増えたからと言っても、クローンの多様性はプレーティングしたタイター以上にはならないことに注意してください。

一方、クローンによって増え方がまちまちなので、amplifyによって、目的のクローンの頻度が下がる場合もあります。一般的に、amplifyしたlibraryをスクリーニングするときは、オリジナルを直接使うときよりも、数倍のプラークをスクリーニングする必要があります。

お礼

返信遅くなってしまいましたm(..)m
とても助かりました。ちょうどストックを解凍しました。

クローンの多様性はプレーティングしたタイター以上にはならないということ気づいていませんでした。
本当にありがとうございました。