締切済み 微量タンパク質の定量について 2006/05/24 14:33 溶液中に ng/ml レベルのタンパク質を定量したいと考えています。 ELISA 以外の方法でも測定できるのでしょうか？ よろしくお願いします。 みんなの回答 （2） 専門家の回答 みんなの回答 saboten30 ベストアンサー率35% (6/17) 2006/05/25 19:24 回答No.2 No.1です。 願わくば、原液で測定した方がよいですよね。 濃縮も可能でしょうが、吸着によるロスの懸念もありますね。 限外ろ過などで膜やチューブに吸着してロスするかもしれません。超遠心だとロスは極力避けれると思いますが。 もう少し探してみてはどうですか？文献で見つかるかもしれないですし。 濃縮は最後の手で・・。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 nopopon2 ベストアンサー率39% (13/33) 2006/05/24 18:54 回答No.1 御意志に当てはまるか不明ですが、こんなのがあります。 タンパク定量について書かれています。 http://www.ktokai-u.ac.jp/~nougaku/Bio/araki/protassay.htm 直線性を求めるのでしたら、pierce社のBCA測定が簡便でよいです。測定濃度レンジによりBCA、マイクロBCAキットがあります。マイクロBCAはよく使っていました。 マイクロBCA http://www.technochemical.com/pierce/protein/assay/micro/microbca.htm 0.5-20μg/mlの測定が可能 BCA測定 http://www.technochemical.com/pierce/protein/assay/bca/bca.htm BSAの測定においては20－2,000 μg/mlの直線性があります。 上記URLに共存物質の影響などもしるされているので、ご参考ください。 質問者 補足 2006/05/25 11:28 ありがとうございます。 ご回答頂いた、μg/ mlレベルではいくつか方法を見つけたのですが、 今回はもう１オーダー小さいレベルで定量を行いたいのです。 濃縮して行うと言う方法も検討しているのですが、 一般的でしょうか？ 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学化学 関連するQ&A タンパク質の定量について 大学でブラッドフォード法を使ってオボアルブミン溶液のタンパク質の定量実験を行いました。 そこで、回収率と実測値、希釈率、タンパク質量を求め無ければいけないのですが、どの数字を入れたら良いのか分かりません。求めかた教えてください。 蛋白質定量法 今卒業研究で｢洗剤」に含まれている｢酵素」（タンパク質分解酵素）がどのような条件で一番汚れを落とすのか。という実験をしていて、今現在は｢酵素」についてそれぞれ調べ物をいています。そして、実験方法は、実験に協力してくれる人の脇・首筋など汗が出やすい箇所にカーゼを貼り、時間・温度・湿度などの条件を変えてガーゼを緩衝溶液で溶かし、そこからどれだけ蛋白質が分解されているかを実験で確認し最適条件を導き出す。と言う事を考えているのですが、私としてはその実験では、アミノ酸を定量する事になるのではないか、そしてこの実験方法以外にも もっと有るのではと思っています。だから、この実験方法 以外の方法やアドバイス・ローリー法以外の方法があったら教えて下さい。お願い致します。 高濃度コラーゲン溶液の濃度測定法 高濃度（3mg/ml）以上のコラーゲン溶液の濃度を測定するのには、どういった方法があるのでしょうか。 一般的なタンパク質定量法では、調べた限りでは、低濃度（～1mg/ml）までしか測定できなそうなのですが・・・（素人なので勘違いかもしれませんが）。宜しくお願いします。 天文学のお話。日本ではどのように考えられていた？ OKWAVE コラム 高濃度コラーゲン溶液の濃度測定法 高濃度（3mg/ml～）以上のコラーゲン溶液の濃度を測定するのには、どういった方法があるのでしょうか。 一般的なタンパク質定量法では、調べた限りでは、低濃度（～1mg/ml）までしか測定できなそうなのですが・・・（素人なので勘違いかもしれませんが）。宜しくお願いします。 高濃度コラーゲン溶液の濃度測定法 ジャンルが違うかもしれませんが、 高濃度（3mg/ml）以上のコラーゲン溶液の濃度を測定するのには、どういった方法があるのでしょうか。 一般的なタンパク質定量法では、調べた限りでは、低濃度（1mg/ml）までしか測定できなそうなのですが・・・（素人なので勘違いかもしれませんが）。宜しくお願いします。 ローリー法によるタンパク定量について ローリー法によるタンパク定量について質問です。 ローリー法はタンパクに含まれるチロシン、トリプトファン、システインを呈色し、その吸光度で定量を行う手法だと理解しております。 しかし、標準品として用いるＢＳＡと測定対象とするタンパクのチロシン、トリプトファン、システインの数が違う場合、定量結果を補正する必要があると思うのですが、どうなのでしょうか。 判りにくい質問だと思いますが、よろしくお願いします。 タンパク質 mg/mlとμMの変換 定量したタンパクをmol/lに変換したいのですが、数字が苦手で混乱しています。助けてください。 例えば、50kDaのタンパクが1mg/mlの濃度で100ulの溶液に入っていたら、 1/50×1000/0.1で200uMでいいのでしょうか？ apoBの定量法について 血漿中のapoBの簡便な定量法について教えてください。ELISAをするにもELISAでの使用が確かめられている抗体がなく、ウエスタンでは定量性に欠けるような気がします。他に何か良い定量方法はないでしょうか？ 血清では測定しても意味がないタンパク質 教えてください。 ELISAでBDNF、EGF、PDGF-bbなどの血清中のたんぱく質を分析したいのですが、ELISAのマニュアルには、血液検体を凝固させる際、血小板に含まれるこれらのたんぱく質が放出され、circulating levelは血清では測定できず、血漿を使うのが望ましいと書いてありました。 しかしながら、BDNFなどは血清中の濃度を測定された論文などもかなりあります。うつ病などの疾患のマーカーとして使えるなどの報告もあります。 血清では本当に測定しても意味がないのでしょうか。 定量下限について GC-MSを用いて定量下限を求める時の方法について教えてください！ いろいろな分析会社のHPやJISなどを見ていると、検量線用標準試料の最低濃度のものを用いて5回なり10回なり測定したときの標準偏差をとり、これを10倍した10σを定量下限値とするようなことが書かれていました。 初心者的な質問になってしまうのですが、この10回測定するというのは、私が見たり読んだりした文脈からは、1度調整した溶液を連続で10回測定すると読み取れたのですが、正しいでしょうか？1ppmなら1ppmの溶液を10個作製して、これを10回測定するというのとは違いますよね？すいませんが教えてください。 タンパク質の抽出・定量について 今度、土壌からタンパク質を抽出・定量をするのですが、同じような実験をしている文献を見ると、 抽出方法→リン酸緩衝液で抽出 定量方法→紫外線吸光法、ブラッドフォード法など で行っていました。 定量方法については、色々な本、文献などがあったので原理等も調べられたのですが、抽出方法がなぜリン酸緩衝液で抽出するのかがわかりません。 参考になる文献や、サイトなども教えていただけたらありがたいです。 インスリンの定量 インスリンの定量について教えてください。現在膵臓β細胞の培養細胞から分泌されるインスリンを測定しようとしています。インスリンのELISAはたくさんの種類市販されているのですが、現在使っている細胞がハムスター由来で、当然ハムスター由来のインスリンを測定するキットは販売されていません。マウスやラットのインスリンELISAで測定できるかもしれませんが、できればハムスター由来のインスリンにクロスする抗体を使ったELISAを購入したいと思っています。細胞はHIT-T15（大日本住友製薬から購入）という名前の細胞です。もし情報お持ちでしたら教えてください。 日本史の転換点？：赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム タンパク質の定量について 実験で、タンパク質の定量でケルダール蒸留を行い、以下のようなレポート課題が出されました。 本を探しても、実験方法しか載っていなくて困っています。一つでも解る方、できる限り詳しく教えて頂けたら幸いです。 １．なぜ水蒸気発生フラスコ内を酸性にするのか ２．なぜ蒸留部が保温構造になっているのか ３．なぜ蒸留の段階から規定硫酸内に混合指示薬が入っているのか タンパク質の定量実験 学校の実験でタンパク質の定量実験を行いました。 実験材料は、モヤシ。課題レポートの考察に「モヤシが実験材料に最適な理由」という項目があります。 モヤシが安価で大量に手に入り易いという理由以外に最適な理由がわかりません。教えて下さい☆ できれば、参考文献も教えてもらえるとうれしいです タンパク質の定量 Ｂｒａｄｆｏｒｄ法 タンパク質（ＢＳＡ）の濃度を0，20，40、60，80,100μｇ／mlに希釈して吸光度を測定しました。 それでグラフ用紙にプロットしていたら濃度が濃くなるにつれて吸光度は上昇しているのですが、曲線になってしまいました。 これは試薬の希釈ミスなのでしょうか？それとも試薬とBradoford試薬を撹拌した後放置しすぎたのでしょうか？どうか教えてください。 クロムイオンの定量分析 Cr6+とCr3+が混合した溶液中のCr3+濃度の定量分析をしたいのですが、吸光光度計分析以外の測定法を探しています。 できれば、原始的な方法、沈殿ろ過や中和滴定などの方法があれば教えて頂きたいです。 さらに、参考になるようなHPがあれば教えてください。 お願いします。 タンパク質定量とSDS-PAGE 現在あるタンパク質を精製しています。このタンパク質の同じ希釈のサンプルを使用しても、Lowry法では一定濃度を示し、Bradford法ではまったく発色しません。なのでタンパク質定量はLowry法で行っています。そしてSDS-PAGEをCBB R-250で染色しようとしてもまったく、染色できません。銀染色で行うとぼんやりとバンドが出る程度なのです。これはただ単にタンパク質濃度が低いだけなのでしょうか？それとも何かいい方法があるのでしょうか？教えてください。また何かアドバイスがあったらいただきたいです。 電位差滴定による塩化物イオンの定量 電位差滴定による塩化物イオンの定量 溶液中の塩化物イオン量を硝酸銀溶液（N/100)による 電位差滴定によって測定しようと考えています。 硫化水素臭がするので、過酸化水素によって酸化して 滴定を行っています。 （測定方法は、JIS A 1154 です） 通常、微分値が極大になったところを滴定曲線 の変曲点として検出し、そこを当量点としていますが なかなか検出できません。 他の簡易的な方法によって測定したところ、塩化物イオンが 検出できたので（正確な量はわかりませんが・・・）、 溶液中に存在すると考えているのですが・・・。 他の試料（水など）の滴定を行うと、きちんと定量できるのに、 これだけはなかなか定量できず困っています。 どうか、よろしくお願いいたします。 SDSやELISAなどの違いについて たんぱく質などの定量や定性に用いられるものにSDSやELISA、ウエスタンブロッティング、サザンブロッティング法などがあると思うのですが、それぞれ主にどのような違いがあって、それぞれ用い方がことなるのでしょうか？ また、これらの方法の他にどのようなたんぱく質などの定量や定性法があるのでしょうか？ ビタミンＣ の定量 ビタミンＣ の定量（リンゴ・レモン の果汁） (1)１００mlメスフラスコに試料をホールピペットで各10mlと取り入れる。 (2) (1)に蒸留水を標線まで加える。 (3)試験管に(1)の溶液を各々ホールピペットで正確に2.0ml測り、６％リン酸二ナトリウム溶液をホールピペットで正確に3.0ml加え混合する。 (4)0.3%ＤＴＴ溶液えおマイクロピペットで正確に0.5ml加え、室温で１０分放置する。 (5)放置後、１%ＮＥＭ溶液をマイクロピペットで正確に0.5ml加え１分放置する。 (6)放置後、発色試薬をマイクロピペットで正確に2.5ml加えよく混合し、３７℃の恒温水槽に入れ、正確に４０分間放置する。 (7)恒温水槽から試験管を取り出し、溶液を比色管に適当量移し５２５ｎｍにおける吸光度を測定する。 (8)検量線からビタミンＣ濃度(mg／ml)を求める。 (1)この実験方法でビタミンＣ の定量をしたところ、リンゴにはビタミンＣ が１ml中に０．１４mｇ。 レモンには１ml中に０．７３mｇ。 とでました。 (2)これを食品成分表と比較すると、食品成分表ではリンゴは(100mg中)４mg、レモンは(100mg中)５０mgでした。 (3) (1)を100mg中に直すとリンゴは１４mg、レモンは７３mgです。 (4)リンゴはビタミンＣ 含有量が少ないと聞きますが、平均の割合が出してある成分表よりビタミンＣ が多いのは、なにか理由があるのでしょうか？ 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば？ Part2 結婚について考えていない大学生の彼氏について 関東の方に聞きたいです 大阪万博について 駅の清涼飲料水自販機 不倫の慰謝料の請求について 新型コロナウイルスがもたらした功績について教えて 旧姓を使う理由。 回復メディアの保存方法 好きな人を諦める方法 小諸市（長野県）在住でスキーやスノボをする方の用具 カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る OKWAVE コラム 突然のトラブル？プリンター・メール・LINE編 携帯料金を賢く見直す！格安SIMと端末選びのポイントは？ 友達って必要？友情って何だろう 大震災時の現実とは？私たちができる備え 「結婚相談所は恥ずかしい」は時代遅れ！負け組の誤解と出会いの掴み方 あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
補足
ありがとうございます。 ご回答頂いた、μg/ mlレベルではいくつか方法を見つけたのですが、 今回はもう１オーダー小さいレベルで定量を行いたいのです。 濃縮して行うと言う方法も検討しているのですが、 一般的でしょうか？