タンパク質の定量 Ｂｒａｄｆｏｒｄ法

質問

タンパク質（ＢＳＡ）の濃度を0，20，40、60，80,100μｇ／mlに希釈して吸光度を測定しました。
それでグラフ用紙にプロットしていたら濃度が濃くなるにつれて吸光度は上昇しているのですが、曲線になってしまいました。

これは試薬の希釈ミスなのでしょうか？それとも試薬とBradoford試薬を撹拌した後放置しすぎたのでしょうか？どうか教えてください。

回答No.2

nopopon2 · ベストアンサー

タンパク定量について書かれています。
http://www.ktokai-u.ac.jp/~nougaku/Bio/araki/protassay.htm
直線性を求めるのでしたら、pierce社のBCA測定が簡便でよいです。測定濃度レンジによりBCA、マイクロBCAキットがあります。マイクロBCAはよく使っていました。

マイクロBCA
http://www.technochemical.com/pierce/protein/assay/micro/microbca.htm
0.5-20μg/mlの測定が可能

BCA測定
http://www.technochemical.com/pierce/protein/assay/bca/bca.htm
BSAの測定においては20－2,000 μg/mlの直線性があります。
上記URLに共存物質の影響などもしるされているので、ご参考ください。

お礼

ありがとうございます。
理解するのにＵＲＬは参考になりました。
またわからなっかたらお願いします。

回答No.1

noname#160321

>>Bradoford試薬
Bradford試薬(oが１つ少ない）^^
添付ＵＲＬの図のように、多くは「直線にならない」ようです。
また、東大の授業資料ＵＲＬ　http://www.biochem2.m.u-tokyo.ac.jp/web/contents/Manuals/manual02.html
のようにＢＳＡは「不適切な例」ではないかと疑っている先生も居られます。

参考URL：

http://www.nacalai.co.jp/toriatukai/pdf/243-244.pdf

お礼

自分でも探したんですけどなかなかよいものが見つからなかったので,参考になりました。
また分からなかったらお願いします。