免疫染色時の1次抗体・２次抗体の濃度

質問

免疫染色初心者です．よろしくお願いします．
血管内皮細胞，線維芽細胞，心筋細胞の特異的タンパクを染めるのに，Von Willbrand factor(rabbit),DDR2(rabbit),α-actinin，２次抗体としてgoat anti-rabbit IgG等の抗体を用います．こういう場合の１次・２次抗体の濃度はやはりある程度100倍，1000倍なり自分で希釈してみて決めるしかないのでしょうか？他の方の質問も拝見して，自分で調べるしかないのかなとは思いましたが，どの濃度で一番反応が出やすいというのはないのでしょうか．よろしくお願いいたします．

回答No.2

grumpy_the_dwarf · ベストアンサー

なにしろ製造ロットによっても力価がばらつくし、抗原の量や濃度
によっても見えやすかったり見え難かったりなので、ある程度は自
分で決めてくしかないと思います。まぁ、とりあえず100倍くらいで
染めてみて、不満がなければそのままGo!ってのもアリでしょうね。

それか、DAKOあたりの「順番にかけるだけで、医者でも染められ
る」と豪語しているヤツを使うんですね。あそこはカタログに、推
奨希釈率を載せています。第VIII因子なら、50倍くらいで使えって
親切に書いてありますよ。とりあえずそれに従ってれば、大コケは
しません。本当はもっと薄くても染まるんですが。

お礼

ご返信ありがとうございます．
DAKOのHP行ってみました．
かなり詳しく載ってますね．
WAKOは知ってますが，DAKOは知りませんでした．
ありがとうございました．

回答No.1

isseifubisepia

抗体の親和性や、組織によってもシグナルの強度が変わるので、一概には言えません。自分の場合は一次抗体200倍二次抗体500倍といった数値を目安としてましたが、こういった調整がうまくいかないと、シグナルが検出されなかったり、バックグラウンドが強くなりすぎたりするので、よく検討されるとよいと思います。もし、その抗体が人からもらったものならば、その人に適切な濃度を聞くとか、また購入したものなら、その抗体を用いた論文を参考にされてはいかがですか？

お礼

ご返事ありがとうございます．
抗体はほとんど新たに購入するものですね．
論文の参考文献をあさっていこうと思います．