DNAシーケンス
DNAシーケンスがうまくいきません。
800bpのPCR産物をTベクターに組み込んでおり、M13ForwardとM13Reverseのプライマーを使用し、両方向からシーケンスしています。
M13Reverse側からはうまくシーケンスできるのですが、M13Forward側からはうまく読めません。
同じプライマーを使って、ほかのプラスミドをシーケンスするとうまくいくのですが、このサンプルはForward側から読めません。
使用しているシーケンサーはABI3730 キットはBig Dye V3.1です。
サンプル量、プライマー量はキットで推奨されている量を使用しており、Big Dyeは1／4希釈です。
何度シーケンスしても読めないのですが原因は何が考えられるでしょうか。また、、何か解決策はあるでしょうか。
補足
回答ありがとうございます。 FIVが細胞に感染すると、ウイルスRNAがDNAに逆転写されて細胞のDNA中に組み込まれ、プロウイルスという形で存在するようになります。私は、FIV感染細胞からDNAを抽出し、目的部分のPCRをして、それをテンプレートにしてシークエンスしようと考えていたんですが。