ベストアンサー 500nmで吸光度測定する理由 2012/07/22 19:54 題名のまんまですが、Somogyi-Nelson法で500nmで測定する理由が知りたいです。 宜しくお願いします。 みんなの回答 （1） 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー kgu-2 ベストアンサー率49% (787/1592) 2012/07/22 22:32 回答No.1 分光法では、極大吸収波長で測定します。感度が良い＝低濃度でも測定できるからです。 500nm付近に極大吸収があるのでしょう。これは、分光分析器で吸収スペクトルをとれば、ピークが500nmになる筈。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学化学 関連するQ&A 260/280nm吸光度測定で可視光ランプをつける必要が？ いつもお世話になっています。 精製したプラスミドの濃度をBECKMANのDU640型分光光度計で測定しています。 この機械はランプがUVとVISと別々にOn/Offできるようになっていて、DNA測定モードでは測定波長が260nmと280nmだったので、いつもUVだけつけていました。 ところが後輩から 「ある先生がUVとVISと両方つけて測定していた」 という報告があり、何故なのか考えているのですが分かりません。 思いついたのは、backgroundを320nm測定しているからという可能性ですが、その先生はbackground測定もoffにしていたということで、私の中ではUVは～350nm、VISは340nm～と認識していたので、かぶるとしても330からくらいではないかと思うのですが。 他に可能性はあるでしょうか？ 解決しなくても実験は進む問題ではありますが、後輩の質問に答えたいと思いますので、どなたかご教授よろしくお願いします。 吸光度測定と酵素活性測定法 化学の実験で乳酸デヒドロゲナーゼを280nm吸光度測定したらほとんど検出できなかったのですが、酵素活性では測定できました。 これは、つまり酵素活性測定法の方が感度が高いということなのでしょうか？また、特異性の高い測定法はどちらなのでしょうか。周囲と話し合ったのですが、 A.酵素活性測定法の方が特異性が高いという側の意見 →酵素は基質特異性があるから、特異性を示すのはこっち B.280nm吸光度測定法の方が特異性が高いという側の意見 →280nmは芳香環をもつ物質に特徴的な吸光度なので、特異性を示すのはこっち という意見がでて、分からなくなってしまいました。ご存知の方がいらっしゃったらアドバイスいただけないでしょうか？？宜しくお願いいたします。 吸光度測定の波長について 吸光度の測定を実験でしたんですけど、 1000nmから200nmまでの範囲でしたんですけど、 なぜこの波長の範囲なんでしょうか？ 吸光度を調べる時に波長が極端に高かったら低かったらいけないのでしょうか？ またいろいろな文献を見て思ったんですけど 測定するときに波長が一番多いのは260nmだったんですけど、 何故２６０nmなんでしょうか？ 天文学のお話。日本ではどのように考えられていた？ OKWAVE コラム たんぱく質の吸光度測定 たんぱく質の吸光度を測定しました ゼラチンと牛の血清の溶液を使って280nmと750nmの吸光度測定をしました。 それぞれ比較したところ、280nmより750nmのほうが牛の血清は高かったのですが、なぜでしょうか？ チロシンとトリプトファンが試薬と反応して発色するから、750nmでたかくなったらそれらが含まれているってことで280nmでも高くなるのでは？と思うのですが。 頭が悪くてよく理解してません すみません、教えてください 吸光度のついて Lowry法により、BSA溶液を用いて、タンパク質の定量の実験を行いました。そこで、吸光度を測る際、７５０nmの吸光度を水を対照として分光光度計で測定したのですが、「７５０nm」という値は、実験により、青色に呈することに関係するのでしょうか？吸光度についてよくわからないのでよろしくおねがいします。 なぜ、278nmで紫外吸光度を調べるのか？ 今、私が見ている論文の中で、4-CP(4-クロロフェノール)の紫外吸光度を調べているのですが、なぜ、波長は278nmでなければならないのですか？ 何か理由があるのでしょうか？ 分かる方がいたら教えてください。お願いします。 DNA，RNAの吸光度（濃度）測定について よく核酸の濃度測定をするのですが，測定の際いつも240nm～320nmの吸光度のグラフを確認しています． そこでお聞きしたいのですが， （１）普段は260nmで核酸の吸光度がピークに達し，きれいな山型が描かれますが，時折，240nmの値が高めで右肩下がりのグラフになってしまうことがあります．280nmの吸光度が高いのは蛋白が混入しているものと認識しているのですが，260nm以下の領域が高くなる時はどういったことが考えられるのでしょうか． （２）それともう一点，吸光度の比『A260/A280値』で，純度が高ければDNAは1.8，RNAは2.0で，当然蛋白が混入すれば比は1.8未満になるのは理解できるのですが，特にRNA濃度の測定の際，比が2.2近くになる事があり，それがどういう意味を持っているのか知りたいと思っています． どちらか一方でも構いませんので，ご存知の方がおりましたら分かりやすく教えていただきたいと思っています．よろしくお願いいたします． 吸光度の原理教えて バイオ関係の仕事をしているものです。 仕事柄吸光度を測定することはよくあるのですが、恥ずかしながら原理がよくわかっておりません。 特に参照波長（reference）の意味が分かりません。 例えば測定波長：450nM、参照波長：600nMと指示されている場合の参照波長の意味合いを教えて下さい。 450nMの一波長ではかった場合と、二波長ではかった場合、結果はどのように違ってくるのでしょうか？ よろしくお願いいたします。 濁度は分光光度計？吸光度計？ ご存知の方、教えてください！！ よろしくお願いします！ 濁度は、分光光度計または吸光度計、どちらでも測定できるようですが、 どちらで行うのが正しいというのはあるのでしょうか？ また、何か別のフィルターが必要などということはあるのでしょうか？ 測りたい試料は培養液中の菌体の濁度です。 菌体の場合、分光光度計でも吸光度計でも波長は600nm前後を使用するのが一般的のようですが、 なぜ600nm前後の波長なのでしょうか？ どんな理由があるのでしょうか？ 調べてみたのですが、基本的な事過ぎるのか、もう周知の事実なのか、 理由までは探せませんでした。 実際に培養液の吸光度を（誤って…）405nmで測定して、菌数をセルカウントで測定、 その結果をもって検量線を引いてみたのですが、R^2も0.94ぐらいで、まあまあよさそうなのですが、 やはり600nm前後の方が良いのでしょうか？ 測定は620nmでやり直すつもりですが、なぜ600nm前後がいいのか理由が知りたく、こちらで質問させていただきました。 よろしくお願いします！ 吸光度計を用いたDNAの純度 吸光度計を用いたDNAの純度は、A260/A280が1.8～2.0で高純度となり、＜1.8だとタンパクなどの不純物の存在が考えられると色々な文献で目にします。 それでは、＞2.0の場合はどのように考えればよろしいのでしょうか？ 260nmは核酸の測定波長で、280nmはタンパクの測定波長だということはわかります。＞2.0ということは、核酸の値がタンパクの値より高いということになりますが、これは高純度と評価しても良いのでしょうか？1.8～2.0という範囲なので、高すぎても高純度とは言えない理由があるのではないかと思いますがわかりません。 ちなみに測定値は ・260nm:0.061 ・280nm:0.027 でA260/A280は約2.2となりました。 回答よろしくお願いします。 吸光度の対照波長ってなんですか 今吸光度を測定してるんですが、測定波長570nm（対照波長は600nm以上とする）って書いてます。無視して570nmで測定した値を結果としていますが対照波長って何ですか？ また、ブランクって必ずおく必要があるのですか？ その際、何をブランクにするのですか？ 私は細胞培養のMTTアッセイで吸光度計を使用しています。ご回答お願いいたします。 吸光係数の測定 タンパク質の吸光係数の求め方を学習したのですが、いま一つ分かりませんでした。 分子吸光係数を求めるのに、吸光光度計を用いて吸光度を測定し濃度とあわせて算出する。 そのとき吸収波長を目的のタンパク質の最大吸収波長(p-ニトロフェノールなら405nm)に あわせてやるとのことだったのですがその理由がよく分かりませんでした。 最大吸収波長なら吸光度が安定するからとも考えたのですが、間違っていないでしょうか。 どなたか分かる方教えていただけないでしょうか。 日本史の転換点？：赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム 吸光度から・・・ 今回実験でラクトアルブミンの吸光度を測定しました。 測定条件は以下の通りです。 ・200mlの牛乳から中和上清164mlを得た。その中和上清のうち30mlを用いてラクトアルブミン(0.18g)を塩析させて取り出した。 ・実験により得られたラクトアルブミン(0.18g・湿重量)を蒸留水で2mlにメスアップ。 ・その2mlのなかから0.2mlとり、5mlに希釈した。（２５倍希釈） ・その5mlをA280で吸光度を測定した。 ・測定結果は ピーク時の吸光度 280.8nm = 0.279 でした。 ※実験書によると、280nm付近でピーク吸光度が１の時のタンパク質の濃度を1mg／mlであると仮定して、タンパク質の定量をせよ。 とあります。 このような条件で、中和上清30mlあたりのラクトアルブミンをどのように計算したらよいのかいまいち解りません。 ただ単に、吸光度より、タンパク質濃度0.279mg／mlだから・・・・×30？？？ でも何かおかしいですし・・・ それとも希釈したから、0.279mg×25 で、さらに吸光度に使用したのは溶液2mlの中の0.2mlだから ×10・・・ 0.279mg×25×10で中和上清30mlあたりのラクトアルブミン量？？？ 考えていると余計に訳解らなくなってしまって・・・ どなたか教えてください。 ヨロシクお願いします。 吸光度測定の時間は？ お世話になります。 吸光度測定について調べていますが、わからないところが あります。 同じ試料を吸光度測定した場合、時間の経過とともに吸光度は変化しないのでしょうか。 例えば、紫外線吸光度の場合、電子がエネルギーを受けて励起することで 吸光が起こりますが、エネルギーを受け続けると励起が飽和していって 吸光度が変化（最後にはゼロ）になるのではないかと思うのですが、間違いでしょうか。 間違いでしたらその理由も説明して頂きたくお願いします。 分光光度計・吸光度とは？ ある液体の濃度測定をお願いしたところ、「分光光度計にて595nmにおける吸光度を測定する」と言われました。僕にはさっぱり意味が分からず、結果の数値を見ても人に説明できません。で、分光光度計とは？吸光度とは何でしょうか？何を測定したのでしょうか？まったくの無知なもので、よろしくお願いします。 1 nm前後のナノ粒子の粒度分布測定方法 1 nm前後のナノ粒子の粒度を正確に測定する方法にはどんなものがありますか？ TEM,AFM,MALDI,光散乱法,X線回折法,液体クロマトグラフ以外に何かありましたら教えてください。 DNA濃度 吸光度 グラフにガタつき とあるサンプルのDNA濃度を吸光度を測定して求めたのですが、260 nm付近で1番高いピークが出ていて、濃度も決して低いわけではないのですがグラフ全体がガタガタしています。グラフがガタついてしまう理由は何が考えられるでしょうか。よろしくお願いします。 紫外可視吸光度測定法について 紫外可視吸光度測定法の問題で・・・ 「紫外吸光度測定法は電子エネルギーの吸収を利用したものであり、可視吸光度測定法は原子核間の振動エネルギーの変化を利用したものである」 という文が正しいか間違っているのか考えているのですが、ちょっと困っています。。 紫外可視吸光度測定法というのは、簡単に言えば、紫外線から可視光線まで波長を変えた光を試料にあてていって、試料中の物質の電子が光のエネルギーを受け取って励起（電子遷移）する現象を利用して、その励起の度合いをそれぞれの波長で測定するわけですよね？ということはこの問題の答えは「×」だと思うのですが、本を見るとなんか可視部と紫外部で違う、というようなことが書いてあってよくわかりません。 どなたかわかる方がおられましたら教えてください。 よろしくお願いします。 吸光度によるプロテアーゼ活性測定について プロテアーゼ活性についていまいち理解できないので教えて頂きたいです。 今回、ヘモグロビン溶液に、5μg/ml、10μg/ml、15μg/mlに希釈したペプシン溶液を加え、TCA溶液で反応を止めて、遠心分離してできた上澄み液の吸光度を測定する実験でした。 また、それぞれの濃度には1本のブランクを用意し、ヘモグロビン溶液にあらかじめTCA溶液を加えておき、そこに各濃度のペプシン溶液を加えて吸光度を測定しました。 教本に「反応液の吸光度からブランクの吸光度を差し引いた値がプロテアーゼによって遊離してきたアミノ酸量に相当する。 反応液中のTCA可溶性物質（遊離したアミノ酸）の280nmでの吸光度0.001の1分間あたりの変化が1単位に相当する。 1単位＝280nmでの0.001の吸光度変化/1分間」と書かれており、 プロテアーゼ活性を計算しなくてはならないのですが… そもそもプロテアーゼ活性とは何なんでしょうか…。調べはしましたが、文献に載っておらず、いまいち理解できませんでした。 それから、例えば、吸光度が 反応液：0.830 ブランク：0.339 の場合、単位は何単位になるのでしょうか？ 回答下さると助かります。宜しくお願いします。 原子吸光度測定法・グラファイトアトマイザとは？ 原子吸光測定法で、いつもフレーム法というのしかやったことないのですが、グラファイトアトマイザ法っていうのは何ですか？ グラファイトアトマイザを通して原子化して測定するもので、フレームレスと聞いたのですが・・・。電気加熱式、という方法とは違うんでしょうか？当方知識・経験が乏しいですがご回答お願いします。 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば？ Part2 結婚について考えていない大学生の彼氏について 関東の方に聞きたいです 大阪万博について 駅の清涼飲料水自販機 不倫の慰謝料の請求について 新型コロナウイルスがもたらした功績について教えて 旧姓を使う理由。 回復メディアの保存方法 好きな人を諦める方法 小諸市（長野県）在住でスキーやスノボをする方の用具 カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る OKWAVE コラム 突然のトラブル？プリンター・メール・LINE編 携帯料金を賢く見直す！格安SIMと端末選びのポイントは？ 友達って必要？友情って何だろう 大震災時の現実とは？私たちができる備え 「結婚相談所は恥ずかしい」は時代遅れ！負け組の誤解と出会いの掴み方 あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
