ＧＦＰ融合タンパク質と抗体が反応しません。何か良い方法はないでしょうか？
A：以下に、実験方法を書いたのですが、どこに問題があるのでしょう?
B：ＧＦＰやその関連のタンパク質の融合タンパクを使われた方で抗体と反応しなかったことはありますか？
Aについて、
酵母細胞内で、GFP融合タンパクを発現させて、
蛍光顕微鏡観察で発現を確認しました。
そこで、
・WesternでGFP抗体と反応させてみたましたが、
バンドがでません。
・免疫沈降後SDS-PAGEやって見てもだめでした。
条件を代え、
１：抗体濃度を変えたり、抗体反応も、オーバーナイトにしました。
２：Westernの条件で、PBSをTBSにしたりしました。
３：Westernで使うタンパク抽出方法は「サンプルbufferでボイル溶解」から、
「１：集菌した酵母にサンプルbuffer・プロテアーゼインヒビターを加え、加熱（100度）２：ガラスビーズを加え、ボルテックスで破砕、加熱、３：遠心」に。
抗体は、マウスIgＧを使っています。
B:について、
論文で、ある種のGFPとの融合タンパクはWesternでは
抗体と反応しなかった。
と書いてあったものがあると、人づてに聞きました。
やはりTagをHAやＭyc、Fragに変えたほうが良いのでしょうか?
長々とすみません。書き方が的を得ていないかもしれませんが、教えてください。お願いします。
