締切済み 大腸菌の取り扱いについて 2009/03/09 18:20 ー80℃でグリセロールストックしてある大腸菌から植菌する時に、菌体が 溶けないようにすばやく操作を済ませるようにした方が良いと聞いたのですが、 それはなぜなのでしょうか？？ みんなの回答 （2） 専門家の回答 みんなの回答 otx ベストアンサー率44% (256/576) 2009/03/10 08:21 回答No.2 もともと凍結することは大腸菌にとって非日常であるわけで、 凍結融解は大腸菌にとってしんどいんじゃないでしょうか。 質問者 お礼 2009/05/15 17:49 まとめてお礼を書かせていただきます。 ありがとうございました！ 通報する ありがとう 0 広告を見て他の回答を表示する（1） lone_lynx ベストアンサー率41% (78/188) 2009/03/10 02:09 回答No.1 そうしたほうがうまくいくから 経験則です 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学生物学 関連するQ&A 大腸菌のグリセロールストック 大腸菌のグリセロールストック 大腸菌をグリセロールストックするとき、マニュアルにはOD600=0.6~0.8と書いてありましたが、培養しすぎて1.2になってしまいました。ちなみにタンパク質を発現させるための大腸菌です。 別にOD600=1.2で作っても問題はないですか？それとも作り直した方がよいでしょうか？ 大腸菌のグリセロールストックの作り方 大腸菌のグリセロールストックの作り方 学生です。大腸菌のグリセロールストックを以下の方法で作ろうと思っています。 １.大腸菌を一晩震盪培養 ２.菌数が1×10^8/ml になったのを確認して、グリセロールが終濃度15％くらいになるように加える ３.液体窒素で瞬間凍結し、ー70℃保存 ２.の菌数が1×10^8/ml になったのを、どのように確認すればいいのでしょうか？吸光度で判断すればいいのかなと思いましたが、どれくらいの吸光度であればいいのかがよく分かりません。 教えてください。よろしくお願いします。 大腸菌のグリセロールストック 大腸菌のグリセロールストックについての質問なのですが、グリセロールの濃度はどのくらいがよいのでしょうか？ 日本史の転換点？：赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム 大腸菌ストックのグリセロールの役割 大腸菌のグリセロールストック中のグリセロールは何のために入れるのでしょうか。 バイオにはあまり詳しくなく、調べてもなかなかそれらしき答えが見当たりません。ご教授お願い致します。 大腸菌グリセロールストックが散ってしまいました お世話になります。 当方大腸菌の実験を始めたばかりのものです。先輩から大腸菌のグリセロールストックを預かり、大量培養しようと滅菌した爪楊枝でグリセロールストックの表面を掻いているうちに、その爪楊枝がピンセットから飛んでいってしまいました。爪楊枝についた大腸菌がベンチに拡散してしまい、他の実験に支障をきたしてしまうのではないかと思っています。というのも、分子生物学で使用する試薬、液体がたくさんベンチの上においてあるからです。どのように対処すればいいでしょうか？一応拭ける範囲では70%エタノールを染み込ませたティッシュで拭いたのですが、チューブの一本一本までは到底先輩が帰ってくるまでに掃除できそうにありません。どうしましょう？急いでいます。よろしくお願いいたします。 大腸菌のグリセロールストックに解凍方法 以前、80％グリセロールでストックした大腸菌を 起こして大量培養しようと思うのですが、 しばらく時間が開いたため、方法を忘れてしまいました。 ＬＢ培地にそのまま加えてインキュベーションすれば よかったでしょうか？ ご存知の方いらっしゃいましたら、ご回答よろしくお願いたします。 グリセロールストックについて? 学生時代、大腸菌をグリセロールストックすると保存状態が良く長期間保存できる?という事をを教わったような記憶があります。なぜ普通に凍結するより状態が良いのでしょうか?理由とグリセロールストックの操作方法を教えて下さい。又、大腸菌以外の微生物にも有効なのでしょうか?教えて下さい。お願いします 大腸菌の超音波破砕処理について 自分の研究室では大腸菌によるタンパクの大量発現の際の菌体破砕処理をする前に、－80度で一旦凍結させます。そうした方が破砕されやすいからと、説明をうけたのですが、なぜ破砕されやすくなるのでしょうか？？ 凍結させることによって大腸菌の細胞膜がもろくなるということなのでしょうか？？ 大腸菌の超音波破砕について 大腸菌でタンパクを発現させ、超音波破砕をし、遠心して上清を回収することで、目的のタンパク質を回収する方法があります。目的のタンパクは、GSTなどの可溶性の高いタンパクを結合させることによりペリプラズム間に移行させます。 ここで大腸菌の壊れている状態について確認させて下さい。 (1)超音波破砕をすると菌体も壊れるのですよね？ (2)ペリプラズムだけを壊すのには、透圧ショックが適切ですよね？ (3)超音波破砕した後、遠心した上清を回収したことは、ペリプラズム＆菌体内全部における可溶性の高いタンパクの回収したことになるのでしょうか？ また、上記の遠心後のペレットの方も上清画分と同様に、SDS-PAGEを行いました。ペレットにはかなり様々なバンドが濃く見えました。 (4)SDS-PAGEをすると菌体は全体が壊れると思いますが、これはSDS-PAGEにおいて泳動する前に、サンプルにSDSを入れてboilする過程において菌体が破裂するのですよね？ (5)界面活性剤（SDS）を加えただけでは、菌体は破壊できませんよね？(6)界面活性剤でペリプラズムのみ壊せているのでしょうか？ 長くなりすみません。菌体が全部壊れているのか、ペリプラズムだけ壊れているのかよく分からなくなってしまったのです。 (7)最後に、凍結粉砕という方法もありますが、こちらも菌体全部壊れますよね？ 大変こんがらがってしまいました。どなたか、よろしくお願いします。 大腸菌について。 とても初歩的なことをお尋ねさせていただきます。 ・大腸菌は、もともと人間の大腸内で増殖・生存している菌なのに、それを食べてどうして病気になるのでしょうか？ ・大腸菌の中で、ガスを発生するのが病原菌と聞いたことがあるのですが、ガスとは何なのでしょうか？ ・一般的な菌検査では、大腸菌群（大腸菌とは関係ない？？）、ガスを発生する菌か否かで検査するのでしょうか？具体的な菌名で検査しないのは、コストがかかるからでしょうか？ ・食品で病原性大腸菌が発生する要因としてどんなことがあるのでしょうか？ 以上ご回答のほどよろしくお願い申し上げます。 菌をそのまま凍結したら滅菌されますか？ 未同定菌の培養液を遠心分離して、 沈殿（菌体）を回収し、そのまま-３０℃で凍結したら その菌体は死滅したと考えますか？ グリセロールなどの保護剤なしでは、菌体細胞内の氷の結晶が大きすぎて 細胞膜を突き破り、菌は死ぬと聞きました。 これはどの程度のレベルで死滅するのでしょうか？ （滅菌レベルか殺菌レベルか） また、凍結する温度によって違いがあれば教えてください。 ”凍結滅菌”などという言葉を聞いたことがないので、 滅菌はされないのでは…と思うのですが、どうなのでしょう？ 大腸菌について 便の中に財布をおとし便を素手で触ってしまい、そしてたまたま指先に傷口があったのですが、それによって大腸菌に感染したりしないか不安です。大腸菌自体は皆持っているのですが、それが血液中にはいったらいけないってききました。それは無害な大腸菌の場合でも血液に入ったらだめなんですか？それとも無害な大腸菌ならば血液中に侵入しても大丈夫で病的な大腸菌が血液などに侵入したらいけないってことですか？ 菌に色を着けたいです 市販のヨーグルトから採った乳酸菌と、大腸菌を用いて実験しているんですが、生きたまま菌体のみを染色出来るいい方法はないでしょうか？ 酵母菌のグリセロールストックの作り方を教えて下さい。 酵母菌のグリセロールストックの作り方を教えて下さい。 現在食品加工の工業的な製品に使用していたサッカロマイセスセレビシエ属の酵母菌が メーカー廃盤になってしまい手持ちの在庫のみとなってしまいました。 素人ながら色々調べてみたのですが、混合種菌であることと、設備が最小限しかないので グリセロールストックしか残された道が無いと思っております。 そこでお聞きしたいのですが酵母をストックする場合はどのようにすれば良いのでしょうか？ はっきり言って仕事で工業的に取り扱った以外は細菌に対してずぶの素人です。 一応-80℃フリーザーとオートクレーブ・液体窒素はこの度買って頂きました。 種菌保存を急務で解決しないといけないので何卒お願い致します。 保存可能期間やグリセロールのパーセンテージ等も教えて頂けると幸いです。 大腸菌ペーパーって何？ 友達に「大腸菌ペーパー」を調べてくれといわれたのですが、僕もネットで探したのですが、なかなか見つかりません。 僕も次第に「大腸菌ペーパー」が何なのかが知りたくなり、興味を持ち始めました。 「大腸菌ペーパー」を誰か知っている方がいましたら、教えてください。 大腸菌株のグリセロールストックの方法 現在、大腸菌株の新しいコンストラクトをつくる実験をしております。そこで担当の教官から「でき上がったらグリセロールストックにするように」との指示があり、いろんな資料を調べたのですが、60％のグリセロールを用意するとしか記述が無く困っています。どなたかご存知の方がおられればお教えただければ幸いでございます。 大腸菌の増殖と増殖抑制について 大腸菌の培養をしています。目的はとにかく高密度に培養することです。菌体構成の蛋白を作らせるためには、原料となる炭素源の濃度と窒素源の濃度に秘密があるとおもうのですが、濃くても良くないと思うし、比率も関係すると思うのですが、適した条件ってなんでしょう。基本的な事とは思いますが、ぜひ教えてください。 大腸菌のフリーズストック 大腸菌のフリーズストックを作って保存しているのですが、先日、ハプニングにより冷凍庫の電源が一時的に落ち、大変危機的な状況に陥りました。 すぐに冷凍庫の方は回復したのですが、フリーズストックの方を確認したところ、表面が多少溶けていました。参考書やイラストレイテッド等を見ると、フリーズストックは少しでも溶けてしまうと、使い物にならないとのこと。 果たして、少々溶けた程度でも駄目なものでしょうか？また、何故一度溶けてしまうとフリーズストックとしての効果がなくなってしまうのでしょう？ ご存じの方、是非ご教授お願いします。 大腸の中にいる大腸菌と、口の中にいる大腸菌は、同じ 大腸の中にいる大腸菌と、口の中にいる大腸菌は、同じ種類のものですか？ 大腸菌について イーエックス大腸菌とはなにか、ご存じの方いますか？ 資料で出てきて、調べたのですがよく分からなくて。 よろしくお願いします 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば？ Part2 今も頑なにEメールだけを使ってる人の理由 日本が世界に誇れるものは富士山だけ？ 自分がゴミすぎる時の対処法 妻の浮気に対して アプローチしすぎ？ 大事な物を忘れてしまう 円満に退職したい。強行突破しかないでしょうか？ タイヤ交換 猛威を振るうインフルエンザ カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
お礼
まとめてお礼を書かせていただきます。 ありがとうございました！