酵素 分子活性Kcatの算出方法

質問

酵素学を初めてやろうとするものです。
何とかVmaxとKmは計算しましたが、kcatをどう算出すれば良いかがよく分りません。教科書で見たkcatの定義は(=Vmax/[E])と書かれており、ある単位時間に対して、タンパク質一分子当りどの程度の基質を生成物に変えられるかであることは分ってますが、Vmaxにはタンパク質の質量項があり、これを単純にタンパク質の分子量で割れば良いのかがよく判りません。ちなみに、Vmax = 60 umol/min/mg, Km = 5 mM, 分子量は15000 Da, 1 mL の中に 0.5 ugのタンパク質を用いています。
酵素学を専攻としてる方は教えて下さい。
よろしくお願いします。

回答No.1

alice_with_tak · ベストアンサー

私がよく使っている方法です。
まずVmaxの単位をmol/minとなるようにしましょう。反応系に混ぜた酵素量は分かっていると思うので簡単だと思います。
次にEです。Eは全酵素量なので単位はmolです。分子量、酵素量は記入されされているのですぐに計算できますよね。
あとは計算すれば単位が/minとなってKcatがでてきます。

Vmaxに関しては参考書によって単位がまちまちですが私はよくM/secとして算出しています。このほうが後々の計算が楽になります。

参考　ヴォート　基礎生化学

お礼

お答え頂いてありがとうございます。
KmとVmaxを求めたのがかなり昔のことで、何でVmaxの単位をumol/min/mgにしたのかが今思うとよく分らないです。
実を言うとレフリーに指摘された急遽kcatを論文に載せろと言われて何年前のdataを探したらVmaxの単位がumol/min/mgになってました。
alice_with_takさんがおしゃるようにすれば一番簡単ですが、もう当時のことが思い出せなくて助けを借りようとしています。
単位だけ見るとタンパク質の分子量だけ割ればタンパク質の単位がmgになってますので、簡単になりそうです。でもその方法が正しいかどうかがよく分らなくて質問しました。もし私の方法が正しければもう一回お返事をお願いしてもよろしいでしょうか。

回答No.2

alice_with_tak

No.1です。

回答の通りで問題ありません。まわりくどい説明で申し訳ありませんでした。Acceptを期待しています！！

お礼

alice_with_takさん！
ありがとうございました。
とっても役に立ちました。
お礼申し上げます。