クローバーの培養について

質問

クローバーの培養について
某大学バイオテクノロジー研究室に所属中の３年生です。今回初めての個人的な実験です。
私たちは学園祭で、４つ葉のクローバーのインビトロガーデンを売ろうと考えてます。
ヤフオクで４つ葉が出やすいシロツメクサを買い、増やした後に表面殺菌などをして無菌化済み培地に植えて売ろうかと思っています。
過去の論文や情報を探したのですがクローバーの培養については
www.foodhokkaido.gr.jp/works/kenkyu_01/0117.pdf
のレッドクローバーのカルス化について位しか見つけられませんでした。しかもやや古いです。
この論文を参考に、買ってきたシロツメクサの葉をとって70%エタノールで10秒、更に次亜塩素酸ナトリウムで20分表面殺菌したのちDWで3回洗浄後、MS培地に0.1ナフタレン酢酸と0.1ベンジルアミノプリンを使った物でカルス化させ、インビトロガーデン用に作ったMS培地に植えればクローバーが生えてくる可能性がそれなりにあるのでしょうか？
間違っていたら教えてください。

またカルスだと突然変異が起きて４つ葉が出にくくなってしまうか心配です。
なのでカルスを使わないインビトロ化の方法やもっとやりやすい培養方法が見つかっていたら教えてください。よろしくおねがいします。

回答No.1

Drgorilla · ベストアンサー

クローバーだと、マメ科かと思いますので根粒菌がいないことによる生育への影響は大丈夫なのでしょうか？
あと、インビトロガーデンがいまいち理解できていないのと、４つ葉のメカニズムを知らないのですが、カルスを経ずに、種子を採って、無菌状態で培地に植えるのは不都合があるのでしょうか。

お礼

こんなわけ分からない質問に解答していただきありがとうございました。
ただいま
(1)70%エタノールで10秒間、1%次亜塩素ナトリウム溶液で10分間殺菌後、滅菌水で3回洗浄。
(2)流水で15分間洗浄後1%次亜塩素ナトリウム溶液で10分間殺菌後、滅菌水で3回洗浄。
で葉片からカルス化試しています
また近々葉柄からのカルス化も試してみる予定です。
解答していただき本当にありがとうございました。

補足

さっそくの回答ありがとうございます。

インビトロガーデンとは試験管内で生長させた植物のことをいい、寒天培地に養分が含まれているため世話をする必要はありません。また試験管の口はアルミホイル等で密封されているため微生物は入り込めずカビが生えたりもしません。

４つ葉のメカニズムについてですが

四つ葉のクローバーの発生が遺伝的要因によるものか、あるいは環境要因によるものかについては議論がなされている。四つ葉のクローバーの希少性は、低頻度で発現する劣性遺伝子の存在を示唆している。一方、四つ葉のクローバーは環境要因に起因する体細胞突然変異や形態形成の異常、また一個体の中で偶然分離した複数の遺伝子の相互作用によっても引き起こされ得る。個々の事例を考えれば、これら4つの要因はいずれも当てはまる可能性がある。
～クローバーwikiより
また葉片に傷がついて4つ葉になる説もありますが、それで4つ葉ができるかやった実験があって結果傷をつけてなかった方が4つ葉になってしまったりとよく分かっていません。
ただ7月頃に4つ葉が出やすいこと、一度四つ葉が出た株はまた4つ葉が出やすくなるといわれています。

よって種子から培養するとほぼ確実に一般的な3つ葉のクローバーになってしまうかと思われます。
また4つ葉のクローバーの種子探してみましたがオキザリスの種子しか見つかりませんでした。

なので葉でも茎でも根でもいいので植物体から培養したいのです。
カルス化させずに植物体から培養できれば一番良いのですが残念ながら論文見つかりませんでした。

また根粒菌についてですが、培地内に窒素は大量に含まれているためインビトロ内で育てる分には大丈夫だろうとのことでした。