蛍光検出

質問

現在カフェインをfura-2と言う蛍光試薬を用いて蛍光検出しようとしています。蛍光強度はカフェイン濃度に依存するかを確認することが目的です。
そこで、緩衝液としてリン酸ナトリウムを用いて蛍光検出を行ったところ、カフェイン濃度が上がるにつれて、蛍光強度は低下しました。しかし、緩衝液としてリン酸ナトリウム＋ＥＧＴＡとすると、カフェイン濃度が上がるにつれて、蛍光強度は上昇し、蛍光強度がカフェイン濃度に依存することが確認できました。　なぜＥＧＴＡを添加するだけで、リン酸ナトリウム緩衝液の場合の結果と逆の結果になったのでしょうか？？

回答No.1

lialhyd

これはvitroでのアッセイですか？
それとも細胞か何かを使ったアッセイですか？

基本的にfura-2もEGTAもCa2+のキレート剤として働きますから、そのあたりが原因だと思いますよ。
ちょっとアッセイシステムがよくわからないので、これ以上は詳しくわかりませんが…。

補足

カフェイン、fura-2、リン酸ナトリウム緩衝液の３つを混合させ、蛍光分光光度計で測定しました。細胞などは使用していません。この３つの物質のみを使用しました。
２回目に行った実験はこの３つの物質にＥＧＴＡを加えて行いました。
カルシウムはどの物質にも含まれていないのですが、なぜＥＧＴＡを加えただけで変化したのでしょうか？