ブロッキングについて

質問

ウェスタンブロットでブロッキングをおこない、
非特異的なタンパク質が付かないようにします。
ブロッキング以降はメンブレンを触ることは勿論駄目ですが、
手袋を付けて実験をしなくてもいいんでしょうか？
タンパク質は付かないのですか？

回答No.5

caliente

いろいろ至らない事云ったみたいですすみません。忘れてください。

> 抗体反応にハイブリパックを使っていますが。
それでベストだと思います。isoyujinさんの云うビニールシールですね。

> 抗体溶液の回収ってやるもんなんですか？いつも使い終わったら捨ててますが。
コスト面で問題なければそれがベストです。貧乏labですみません。

>スキムミルクは実験用のです。念の為。
○P(雪印/大日本製薬)のブロックエースとか和光で売っているものとかと言う事ですね。飲用でも上手く行く系なら全然問題ないですが。どのメーカの何が良いとか悪いとかはよく出てくる話ですが...。

回答No.4

Dr_Hyper

今問題にされていることは、メンブレンを手袋で触るということではないですよね。一般的な1-2次抗体、ケミルミと呼ばれるECLキットなどの検出法を用いているときに、手袋をしないことでケラチンなどが洗浄中、抗体反応中に付着してシグナルを脅かすことはまず無いといっていいでしょう。もちろん、微量のケラチンを検出しているとか、検出がラジオアイソトープだとか、アザイドを多量に含んでいるとか（２次抗体でHRPが使えませんが）は、別の意味で必要ですが。ただ、非常に微量のものを高感度に見ている場合。高感度のケミルミを使用しても３０分以上のexporseが必要なときなど、手袋着用、容器、ピンセットの洗浄などいろんなことに気を使うことにこしたことは無いと思います。

回答No.3

isoyujin

スキムミルクは実験用のです。念の為。

お礼

どういうことですか？

回答No.2

caliente

上手くやればＯＫっと。もちろん最後まで手袋で慎重を期するのは良い事ですが、みんなぱっぱとやってしまって問題なしというのが実情でしょう。検出の仕方にもよりますが...。
シーラーが無ければ、適当な大きさのチャック付きポリ袋(ジップロックみたいな奴)を利用するのも良いですね。扱いがラクチンです。必要溶液が少し大目に必要なのと、洗いや最後の抗体溶液の回収がしにくくなるけど...。
バックグラウンドに問題が無ければ、確かにスキムミルクが安くて良いですね。でも、出入りの業者が買ってくるのかな？

お礼

回答ありがとうございます。
スキムミルク自体はスーパーで売っていますよね。
シーラー、ポリ袋を使うんですか？
抗体反応にハイブリパックを使っていますが。
抗体溶液の回収ってやるもんなんですか？
いつも使い終わったら捨ててますが。

回答No.1

isoyujin

幅広のピンセットを使っていましたけど、始めから、ビニールでシールしておくと、便利です。少量の反応液で実験できます。ブロッキングはスキムミルクが安価です。