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FACSでのPI溶液作成について
FACSにて細胞の各種レセプター等の検出を行っています。先輩の見よう見まねで、今までは何とかなったのですが、先日、死細胞を除くために使っていたPI溶液がなくなりました。 SIGMAから100mgの粉末のPIを買ったのですが、どうやって溶くのかわかりません。 以前の試験管には、RNAase?やらNaCitrate?などと書いてあった気がします(捨ててしまいました)。 標準的なPI溶液の作成方法を教えてください。
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- komii
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回答No.1
死細胞を取り除くPI??? 低張っていうことでしょうか? 私が前にやっていた方法なのですが、 PIは500μg/mLでPBSに溶解します。 PIはDNA以外にRNAにも結合しますので、細胞中のRNAを破壊する必要がある為、RNaseで処理しなくてはいけないのですが、0.25mg/mLをPBSに溶解します。 それか、PIを50μl/mL、0.1%クエン酸Na、0.2%NP-40、RNase0.25mg/mL を蒸留水に溶解します。 ベクトンディキンソン?かどこかで、簡便にフローサイトできるPIのキット売っていましたので、そちらを用いるのもいいのではないのでしょうか? 参考までに。 Arline D.Deitchi,et al A stable propidium lodide staininng procedure for flow cytometry