プロテインキナーゼの活性を蛍光分析

質問

プロテインキナーゼによってリン酸化されるタンパク質を修飾して、プロテインキナーゼの活性をin situやin vivoで蛍光分析する方法にはどのようなものがあるのでしょうか？

回答No.2

MIYD · ベストアンサー

そのタンパク質のリン酸化特異的抗体を使ってICCをすれば見れるかもしれません。
抗体の特異性次第ですが。

回答No.1

MIYD

基質となるタンパク質を"修飾"してvivoでリン酸化を蛍光で調べる方法ですか。

抗体での検出は修飾によるものではないので使えないですし、
vivoで目的のタンパク質だけに修飾するのは難しいので、

基質となるタンパク質を精製して、リン酸化によって構造が変わって距離が変わる場所2箇所に蛍光物質をつけて、
そのタンパク質を細胞に入れて、FRETによって検出してはどうでしょう。
適当な長さの足場をつければ不可能ではないと思いますが‥

補足

構造の変化を使ってFRETも出来ますが、リン酸化自体を見たいのです。修飾でなくてもいいのですが、in vivoで他にどのような方法がありますか？
宜しくお願いします。