ベストアンサー mRNA発現量を求める実験法 2006/01/12 17:06 mRNA発現量を求める実験法で ノーザンブロッティング以外のもので ご存じの物があったら教えてください！ よろしくお願いします。 みんなの回答 （3） 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー kshimo ベストアンサー率42% (3/7) 2006/01/13 18:21 回答No.3 目的のｍRNAの発現量を観察する場合は ほとんどの場合、いったんｃDNAに逆転写して その後、そのRT-PCR産物を鋳型として 通常のPCRを行います。 肝心の目的物の量を測る方法はいくつかあるのですが 最も簡単なものはPCRがプラトーに達する前に PCRを止め（20サイクル程度）電気泳動後 ゲル染色やサザンブロットによって 目的産物量を可視化、定量します。 ｍRNA量が多い＝鋳型量が多い＝同サイクル数なら より強いシグナル となるわけです。 もう一つの方法はリアルタイムPCRと呼ばれる方法で 検出試薬にサイバーグリーン（2本鎖のみが 検出される）を用いて1サイクル進むごとに PCR産物量をシグナルから算出する方法です。 「ライトサイクラー」で検索すると その機器がどういうものかわかると思います。 これを使って 「ある一定量にPCR産物が達するときのサイクル数」 を求めます。ｍRNA量が多い＝鋳型が多い＝より少ない サイクル数で一定量に達する ある細胞グループ内のｍRNA全般の動向を調べるなら 昔ながらのディファレンシャルデスプレイや最近なら DNAチップ、マイクロアレイ、SAGEなどかな 質問者 お礼 2006/01/15 16:29 なるほど。わかりやすかったです！ありがとうございました！ 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 その他の回答 (2) MIYD ベストアンサー率44% (405/905) 2006/01/13 14:41 回答No.2 問題文を読んでも何をしたいのか良くわからないのですが、 mRNA全般を調べたいという意味ならば 銀染色(CLEAR STAIN Agなど) 長く流せばディファレンシャルディスプレイができます。 質問者 お礼 2006/01/15 16:23 レポートの課題でした。返答ありがとうございます！！ 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 popporu ベストアンサー率50% (8/16) 2006/01/12 18:01 回答No.1 使えるならリアルタイムRT-PCRが一番よいのではないですか。 www.takara-bio.co.jp/prt/pdfs/prt4.pdf それが無理なら半定量RT-PCRでしょう。 マイクロアレイとかSAGEでも一応調べられるとは思いますが、 多分今回の要望には沿わないでしょうか。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学生物学 関連するQ&A mRNA・タンパク発現 ある因子Ａを与えたとき、タンパク質ＡをコードするｍＲＮＡの発現量が増加していたとすると、どのような機構が働いたと考えればいいのでしょうか？ また、因子Ｂを与えると、ｍＲＮＡ量に変化はなく、タンパク質Ａは増加していました。そのようなときはどのような機構が働いたとかんがえられるのでしょうか？ その機序を調べる実験方法も教えていただければうれしいです＞＜ 蛋白の発現量 ウエスタンブロッティングで、目的蛋白の発現量を見ようとしたのですが、目的のバンドの位置に非特異のバンドが出てしまって発現量を見ることができず、目的蛋白に対する一次抗体も使えるかどうか確認できていません。 卒論の締め切りが近いので、あと２週間ほどで蛋白の発現量を見たいと思っているのですが、どのような方法で実験を進めていけばよいでしょうか？ 素人のため、初歩的な質問で申し訳ないのですが、アドバイスをいただけたらありがたいです。 RT-PCRとノーザンブロッティング こんにちは． 生物学実験を始めて1ヶ月の素人です． 先日，RT-PCRとノーザンブロッティングの定量性について 議論している人を見かけました． どちらもmRNAの発現量を見る方法としては一般的だと 思うのですが，定量性が優れているのはどちらなのでしょうか？ ただの好みの問題なのでしょうか？ また，それぞれの長所,短所はどのようなものなのでしょうか？ ご存知の方がいらっしゃればご教授ください． よろしくお願いします． 天文学のお話。日本ではどのように考えられていた？ OKWAVE コラム mRNAにおける遺伝子の発現について 遺伝子実験初心者です。 mRNAにおけるとある遺伝子の発現レベルを調べる実験を行おうとしています。 リアルタイムPCRを行える環境でないため、次のように実験を行おうと思っています。 RNAの抽出→RNA量の測定→RT-PCRでcDNAを作製→目的遺伝子のプライマー＆ハウスキーピング遺伝子のプライマーを用いてそれぞれPCRにて増幅→電気泳動にてバンドの濃さを確認。 Aの細胞集団(1×10の6乗個)から抽出したRNAと、Bの細胞集団(5×10の6乗個)から抽出したRNAにおける、とある遺伝子の発現を比較したいのですが、両細胞から抽出したRNAをAとBで同量になるようにして実験を行えば、正しい比較ができていると言えますか？ サイトカインのmRNA発現に変化があるが、培養上清には変化がない サイトカインのmRNA発現に変化があるが、培養上清には変化がない ある試薬Aが培養細胞のサイトカイン発現に与える影響を検討しています。 これまでに試薬Bで培養細胞を処理することで、 いくつかのサイトカインのmRNAおよび培養上清中のタンパク量が増加することがわかっています。 今回、試薬Aにて前処理を行うと、前述のmRNA発現上昇が抑制されることがわかりました。 しかしながら、（様々な条件を検討しましたが）培養上清中のタンパク量の増加は抑制が認められません。 今後、同サイトカインの細胞内蓄積量をWesternBlotにて検討することを考えています。 （mRNA発現はrealtime-PCR、培養上清中のタンパク量はELISAキットにて測定しました。） このように、「分泌タンパク量には変化がないようなmRNA発現変化」は 生体において、あまり意味をなさないように思うのですが、 どのような解釈が考えられますでしょうか？ GH ｍRNAのプライマーについて competitive RT-PCRによりGH mRNA発現量を定量したいのですが、それに最適なGH mRNAのプライマーをご存知の方、もしくはその検索に役立つ論文等をご存知の方は教えてください。 細菌の未知のmRNAの配列を特定する方法 組み換えDNA実験初心者です。 細菌の蛋白質の発現量をmRNAで追いかけようとしています。 蛋白質のアミノ酸配列解析などを介さずに、未知のmRNAの配列を特定する方法は無いでしょうか？ たんぱく質の同定法について ある分子が、たんぱく質であるかどうかを調べるにはどのような方法を用いて実験したらいいのでしょうか？ また、たんぱく質の発現量を調べるにはウエスタンブロッティングでいいのですか？ ゼブラフィッシュmRNA強制発現 レポートを書いていてふと疑問に思ったのですが、 ゼブラフィッシュmRNA強制発現 ある特定のタンパク質の胚全体での局在を知りたいとして、そのタンパク質のmRNAからcDNA、mRNA(GFP付き)と合成し、初期発生胚にインジェクションした場合、全割球に行き渡り発生していきますが、 その後、観察する時期になって、蛍光させた際、そのタンパク質の胚全体での局在の観察は可能でしょうか？？例えば頭部や脊索のみ蛍光させたり。もちろん頭部や脊索に特異的に発現するタンパク質があればの話ですけど。 それとも、全ての細胞で発現して蛍光してしまい、細胞内局在は観察できても胚全体での局在は観察できないのでしょうか。 現在、学校も休みで図書館もやってなく調べる事ができません。今知りたいので、どなたかわかる方がいらっしゃいましたら回答の方していただけたら幸いです。 不明瞭な点等多いと思いますが、よろしくお願いします。 生物の専門用語でしたら大丈夫です。 遺伝子高発現 出芽酵母を使って遺伝子高発現の実験をしているのですが、発現量がどの程度増えたら『高発現』というのでしょう？ちなみに、タンパク高生産が目的ではなく、純粋に遺伝子の高発現による性質の変化を調べています。 RNAとタンパク質発現の乖離について RNAとタンパク質発現の乖離について質問させてください． 元来その組織、細胞には発現しないタンパク質が発現する状態、いわゆるタンパク質の異所性発現は，mRNAも発現していたと思います． 質問は、「mRNAが発現していないのにタンパク質が発現する事」ってあるのでしょうか？あるとすればそのメカニズムを教えてください． お願いします． 最近DNAウイルスを扱う卒業研究を始めました。 最近DNAウイルスを扱う卒業研究を始めました。 その中でノーザンブロッティングの話が出てきたのですが、ノーザンブロッティングってmRNAの検出法ですよね？ なのになぜDNAウイルスを扱う上で、サザンじゃなくノーザンが必要なのか分かりません。 DNAウイルスの増殖が関係しているのだと思うのですが、調べてもよくわかりませんでした。 教えてください。 日本史の転換点？：赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム 蛋白の過剰発現 こんにちは。早速質問です。 IGF-1R（インスリン様成長因子１受容体）についてですが、この遺伝子は正常組織に比べ、腫瘍組織において蛋白レベルで過剰発現しており、この蛋白の機能の阻害をターゲットとする治療薬も開発されつつあります。 ところが、腫瘍組織においてIGF-1R ｍRNAレベルは、正常組織と同程度、または正常組織より発現量が低いのです。 ｍRNAの発現は増加していないのに、蛋白レベルでの過剰発現がみられるのはどうしてでしょうか？？ 転写が促進されている原因やらいろいろ調べてみたのですが、なかなか解決できないので、甘えてしまって申し訳ありませんが質問させていただきます。 mRNAへのプローブ作成について 実験でmRNAを検出したいと考えています。 そこで，簡単なことかと思いますが・・・ NCBIなどに掲載されている塩基配列は，mRNAの配列かそのcomplementaryが掲載されているのでしょうか？？ ご存知の方は教えていただけませんか？？ ターゲットはバクテリアを考えています。 遺伝子の発現量 プラスミドを使って、酵母細胞内で遺伝子を発現させています。同じプラスミド、プロモーターを使えば、どんな遺伝子でも同じ量が発現されるのでしょうか？ ｍRNAワクチンについて２つ質問です。 ｍRNAワクチンについて２つ質問です。 １．このワクチンによって作られる抗原タンパクが、自身の細胞の膜上に発現することは無いのでしょうか。あるとすれば発現した細胞が自身の免疫細胞のターゲットになってしまう危険性は無いのでしょうか。 ２．コロナウイルスについてはｍRNAワクチンが主流なようですが、インフルエンザのようにニワトリ胚を用いた抗原タンパクの製造が行われないのはなぜでしょうか。こちらの方が、ｍRNAワクチンより、より安全性が高いように思いますが。 誤解があるといけないので一応言っておきますが、私は反ワクチン主義者ではなく、実際4回のワクチン接種を済ませています。 遺伝子発現について 遺伝子発現（mRNAの発現からタンパク質の不安定化まで）の制御について書け この様な問題を出されたのですが プロモーターに基本転写因子が作用しRNAポリメラーゼと結合してmRNAが合成される事 基本転写因子、エンハンサー、ヒストンのN末端修飾による転写制御 これらについて書けばいいのでしょうか？ もしくは足りない部分はあるのでしょうか？ 自分はタンパク質の不安定化についてよくわかりません どうか解答お願い致します 遺伝子の発現について。 遺伝子の発現について。 まだ研究して間もない者です。癌に関連する遺伝子の発現について解析を行っています。 mRNA・タンパクレベルで正常組織に比較して癌組織での発現が亢進していました。 しかし免染と臨床指標との相関で、腫瘍の進行、浸潤が進むと発現が小さくなる傾向を示していました。 つまり、正常よりも癌では有意に発現が上がりますが、癌の中では進行とともにタンパクの発現が弱くなっていました。 論文を検索しても、同様な傾向を示す遺伝子は確認できず、研究が上手くいっていないのかと頭を悩ませています。 つきましては、このような傾向が起こりうるのか、また他の遺伝子でそのような傾向を示している論文をご存じの方がいらっしゃいましたら、ご教示いただけますと幸いです。 よろしくお願い申し上げます。 タンパク質の一般的な発現量 各発現系の一般的な発現量を知りたいのです。 「一般的」というのは解釈に困る表現とわかっているのですが。 もちろん、発現させるタンパク質、培養条件などなどで 全然結果が違うのはわかります。 でも、それらを踏まえたうえでの「一般的」な発現量です。 参考にできる論文や書籍などありましたら教えてください。 一般的な発現量が知りたい発現系は ・大腸菌(E.coli) ・酵母(S.cerevisiae) ・酵母(P.pastoris) ・動物細胞 ・昆虫細胞 ・無細胞系（小麦胚由来） ・無細胞系(大腸菌由来) です。 例。大腸菌 数mg-20mgくらい とかで、よろしくお願いします。 もちろん、全ての発現系でなくても、幾つかわかる範囲でお願いします。 調べても、雰囲気はわかるのですが 一般的にだいたいどれくらいタンパク質が発現するかがわからなくって困ってます。 v-src安定発現株について、教えて下さい 私はウイルスによってNIH3T3細胞にv-srcを発現させて安定発現株の作成を試みています。 発現チェックのためにウエスタンブロッティングを行ったところ、c-Srcと思われるバンドの下にもう１つバンドが検出されました。 ですが、よく見るとw.tのNIH3T3細胞にもc-Srcと思われるバンドの下にもう１つバンドが薄く検出されていました。 そもそもc-Srcもv-Srcも分子量があまり変わらないはずですが、ウエスタンブロッティングで発現を確認するにはどのようにc-Srcとv-Srcのバンドを見分ければいいのでしょうか？ ちなみに使っている１次抗体はMilliporeのGD11という抗体でc-Srcとv-Src両方認識するとの記載があります。 研究初心者なもので、至らないことがたくさんあるかと思いますが、どなたか教えてください。 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば？ Part2 結婚について考えていない大学生の彼氏について 関東の方に聞きたいです 大阪万博について 駅の清涼飲料水自販機 不倫の慰謝料の請求について 新型コロナウイルスがもたらした功績について教えて 旧姓を使う理由。 回復メディアの保存方法 好きな人を諦める方法 小諸市（長野県）在住でスキーやスノボをする方の用具 カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る OKWAVE コラム 突然のトラブル？プリンター・メール・LINE編 携帯料金を賢く見直す！格安SIMと端末選びのポイントは？ 友達って必要？友情って何だろう 大震災時の現実とは？私たちができる備え 「結婚相談所は恥ずかしい」は時代遅れ！負け組の誤解と出会いの掴み方 あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
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