教えて下さい。

質問

酵母からTRIZOLを使ってtotal RNAを取ることになったのですが、
DEPC処理水の作りかたが分かりません。
一応、0.1%になるようにDEPC(Sigma)を分注後、2から3時間撹拌後、オートクレーブしました。DEPCの臭いが残ってると以後の実験に支障をきたすのでしょうか?

あと、first strandをギブコのSUPER SCRIPTを使って合成しようと思うのですが、RTを加えたあとの42度、50分でどのくらいの長さのfirst strandができるのでしょうか?
よろしくお願いします。

回答No.1

hebikera

DEPC処理水は多少臭いが残っていても大した影響はないと思います。
どうしても気になるのでしたら、もう1度オートクレーブにかける程度で
充分だと思いますが。
また、ファーストストランドの合成に関して、カタログでは45度、30分で
3.5kbまで増幅可能だとかいてますよね。
どれくらいの長さが必要なのかわかりませんが、3.5kbでは短い、または
念のためもっと長く合成するようにしたいということでしたら、同じくGIBCO
のエンゲロース酵素ミックスを併用することで9kbまで増幅できるように
なるようですので、そちらをご利用になってはいかがでしょうか?

お礼

ありがとうございました。
参考になりました。