細胞の同定

質問

生物培養初心者です。

現在、鳥の砂嚢組織から（平滑筋）細胞を取り出し、それを培養しているのですが、
本当に平滑筋細胞を培養しているのか分からなくなりました。
そこで細胞内のアクチン染色をして同定したいのですが、
平滑筋細胞特有のアクチン染色はどのようにすればいいのか、わかりやすく説明していただけると助かります。

また、染色以外の方法で同定法があればそれでも構いません。
よろしくお願いします。

回答No.1

jing0708 · ベストアンサー

アクチンの染色は基本的にハウスキーピングとして使うことは多いものの、細胞の同定としては用いることはないと思います。研究室の先輩に聞いたほうがいいですよ。

基本的には平滑筋細胞特有のアクチン系の繊維を染色するのであれば、蛍光あるいはRIがついた抗体を用いて行うのが一般的です。

砂嚢から初代培養をしているのだと思いますが、そうであれば平滑筋だけを培養しているということにはならないと思います。私自身初代培養で研究をしていますが、普通は細胞はヘテロになります。仮にフロサイトメトリーを用いて抗体で分けているなら、それは平滑筋単体だということになるので疑問を感じる必要はないと思います。

もし、なにか同定したいのであればPCRのほうが簡単だと思います。平滑筋細胞特有のｍRNAはたくさんありますので、それのどれかについてのプライマーを設計し（Pubmedで既報を探しても良いですが必ずBlastにかけて他の物がかからないかは確認したほうがいいですよ）、電気泳動で確認するのが良いと思います。
免疫染色でも構いませんが、抗体の単価が高いのでオススメしませんし、必要な試薬が揃っているかが疑問です。

お礼

ご説明ありがとうございます。
一応免疫染色で同定できました。

PCRやウェスタンブロティングも考えたので、アドバイスいただけて勉強になりました。