遺伝子導入 リポフェクトアミン

質問

リポソームを用いた遺伝子導入方について質問します。

現在、インビトロジェンから発売されている「リポフェクチン」や「リポフェクトアミン」を用いて遺伝子導入しようと考えているところなのですが、導入したいDNAは、環状のままよりも、直鎖化した方が導入効率が高いのでしょうか？　

近くにこの試薬を用いたことのある人がいないのでアドバイスお願いします。

回答No.2

noname#4684 · ベストアンサー

ちょっととらえ方をまちがえていると思います．

直鎖化するのは，ゲノムに組み込むためです．環状・直鎖が遺伝子導入効率に大きな影響を与えることはないと思いますよ．

SV40T遺伝子がすでに導入されたセルライン（COS7や293T）にsv40-oriを含んだプラスミドをトランスフェクションすると，導入した細胞内でプラスミドは増幅できます．だからタンパク質を高発現できます．

このとき，環状ではなく直鎖化しておくとそれがおこりません．この状態でG418などの薬剤でセレクションすると，生存できる細胞は必然的にゲノムにプラスミドがインテグレートした細胞のみになるはずです．

と，ここまで書いて思ったのですが環状のほうが質問者様の意図にあうと思います．トランスフェクションの効率はあまり差がないですが，環状だとその後増幅しますから，遺伝子導入効率が高いのと同じですよね．

お礼

お礼が遅くなってしまい申し訳ありませんでした。

そうですね。ゲノムに組み込むのが目的でなければ直鎖化する必要はないのですね。
とても参考になりました。ありがとうございます。

回答No.1

t_m_p

正確に導入効率を測ったわけではないですが、
一過性発現ならばどちらも大差ないはずです。
Stableに発現させるのなら、直鎖の方が良かったはずです。

お礼

お礼が遅くなってしまい申し訳ありません。
比較した人はあまりいないのかもしれませんね。

参考にしてみます。
ありがとうございました。