PCR法について

質問

この実験の試薬としてExtraction Buffer中には尿素とドデシル硫酸ナトリウム、Lysis Solution中にはジチオスレイトール、Enzyme Solution中にはプロテアーゼKが主成分として含まれているんですけど、この各成分の役割はなんなんでしょうか？どなたか詳しい方，大変申し訳ありませんが回答よろしくお願いします。

回答No.2

Kohntarkosz

#1ですが、これら試薬はDNAには作用するのとは違うと思います。DNAを取ってくるために他の細胞成分に作用させています。尿素は強力なタンパク質変性剤でSDSは界面活性剤ですので、サンプルのタンパク質を変性させる（酵素なら失活させます）とともに生体膜を破壊します。DTTは還元剤ですので、サンプルが必要以上に酸化されることを防いでいます。プロテイナーゼKは各種酵素（核酸分解酵素など）を含むタンパク質を分解します。つまり、このキットを用いて抽出すると、細胞構成成分のほとんどが不活性化され分解されます。そして、残ったDNAが取れてくる、という感じではないでしょうか？

お礼

ありがとうございます。
100％理解したか分かりませんが、
この方法についてかなりの知識を得ることができました。
詳しい説明本当にありがとうございました。

回答No.1

Kohntarkosz

まず、それら試薬はタイトルの「PCR法について」とは関係ないと思います。尿素とSDSは変性剤ですし、DTTは還元剤、プロテイナーゼKは文字通りタンパク質分解酵素です。サンプル作成用の試薬でしょうね。これら試薬を使って細胞を壊してDNA（多分ゲノムDNA）を取ってきて、それをPCRするのでしょうね。

お礼

なるほどそうなんですか。
ありがとうございます。
追加みたいな感じになって失礼なんですが、その変性剤、還元剤、たんぱく質分解酵素はそれぞれ何に作用するんでしょうか？
やはり回答にあった通りにすべてDNAに作用するんでしょうか？