plasmid DNAがない
先輩から目的遺伝子が組み込まれたplasmidを、
competent cellに感染させ、増やして欲しいと
言われ実験をおこなっています。
しかし、コロニーピックアップし一晩培養した
培養上清を回収し、QIAGENのキットでプラスミドDNAの
抽出をおこなったのですが、全てDNAが10ng程度しかなく、
困っています。
私の考えでは、抗生物質含有の培地のコロニーを
ピックアップし、さらにスケールアップする際も
抗生物質含有の培地で培養したので、プラスミドDNA
が入っていないとは考えられないのですが、、、。
今のところ、キットでタンパク沈殿させた際の
DNAの濃度をはかり、プラスミドの増殖をチェックし
ようと考えています。(キットの操作には間違いは
ありませんでした)
何か、考えられる原因があれば詳しい方お教えください。
ちなみに今までの実験の流れは、以下のように行いました。
1.plasmid DNA(invitrogen pcDNA3.1)を
one shot competent cellに感染させる
2.アンピシリン含有LB培地によりセレクション
3.コロニーを一晩5mlのアンピシリン含有LB培地で培養しスケールアップ
4.1mlの上清回収し、プラスミドDNA抽出
お礼
迅速かつ丁寧な回答をいただき、ありがとうございます。アンピシリンは増殖抑止的に作用するのですね。殺菌的に働くものと思っていました。教科書を調べてもなかなか載っていなかったので困っていました。大変参考になりました。