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細胞を固定し1週間後に免疫染色したのですが・・・
細胞をPFA2%で固定後、乾燥させないようにPBSをいれて1週間冷蔵庫に入れておきました。その後、免疫染色したのですが予想外の場所が染色されてしまいました・・・さすがに1週間保存は難しいのでしょうか？それとも他の原因を考えたほうがよいのでしょうか？
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わたしが扱っている材料では、whole mount標本などを固定後、免疫染色に取りかかるまで保存するときは、70% エタノール、またはメタノール中で-20 C保存するのが一般的に行われています。こういうプロトコールがあるということは、バッファ中で材料を保存するのは好ましくないからでしょう。 しかし、アルコール中で冷凍庫保存しても、抗原によっては抗原性が悪くなったり、拡散してしまったりするせいか、染色結果が著しく損なわれる場合があります。また、メタノールはある種の抗原の抗原性を著しく損なうことが知られています。事前にこういう方法で保存できるかどうか検討しておく必要があるでしょう。 ご参考まで
お礼
ありがとうございました。 参考になります。 やっぱりそうなんですか・・・ 手を抜かずに一気にかたをつけます。