ＨＰＬＣ 純度 不純物 重ね打ち

質問

はじめまして。HPLCを用いて、分析をしている大学院生です。
HPLCを用いて、合成品Ａの純度確認を行っています。合成品Ａを0.1%　w/v%調整し、分析しています。不純物ピークが四つ見られ、その不純物を特定するために、不純物（と考えている）標品四つと合成品Ａとを「重ね打ち」するように先生にアドバイスを受けました。「重ね打ち」についてよく理解できていません。
・試料の調整の仕方がわかりません。 合成品Ａを0.1%　w/v%調整したもの中に、不純物と考えられる標品四つを混ぜ合わせたものを試料として、HPLC で分析すれば良いのでしょうか?各不純物はどのくらいの割合（それぞれ何 w/v%に調整し、それぞれどれだけの体積を）入れて分析するのでしょうか?
・各不純物の同定の見なし方がわかりません。各ピークの同定は、重ね打ちした際、ピークが割れずに一つのピークであれば、同定と見なしても良いのでしょうか？
その他にも、「重ね打ち」で重要な点がありましたら、教えてください。

合成品ＡのHPLC分析における面積%は、
主成分ピーク（合成品Ａ）：96%
不純物ピークＢ：2%
不純物ピークＣ：1%
不純物ピークＤ：0.5%
不純物ピークＥ：0.5%
です。
宜しくお願いします。

回答No.1

noname#160321 · ベストアンサー

>不純物と考えられる標品四つを混ぜ合わせたものを…
混ぜないで一つずつくわえたサンプル四種を作るのが適切です。
>それぞれ何 w/v%に調整し…
不純物ピークが2％以下ですので、モル吸光係数を合成品Ａとほぼ同程度と見て、標品は0.001% W/V程度が適切でしょう。多すぎるとピークが完全に隠れてしまい、ピークが分裂しているかどうか分りません。
インテグレータの値が正確なら不純物の収率の概算も出来ます。

お礼

ありがとうございます！
大変参考になりました!!
0.001% W/Vで同じくらいのピーク面積になるように各試料を調整して、ピークの分裂の有無を判断して、同定するんですね。
とても助かりました。

補足

すいません！付けたしなのですが、比較で不純物の標品を測定する際は、0.1%　W/Vで調整すれば良いのでしょうか？0.001% W/Vにした方が良いのでしょうか？

回答No.2

km1939

不純物の同定と濃度を知りたいのですね。
　(1)．不純物４種を0.001%W/V位になるように混合溶液を作ります。
　(2)．この溶液をHPLCに注入します。
　(3)．リテンションタイムの違いによって４つのピークが出ます。
　(4)．次に合成品をHPLCに注入します。
　(5)．合成品ピークと不純物のピーク(ピーク位置は(3)と同じ）が
　　　出るはずです。
　(6)．ピーク位置から不純物の同定ができますので、あとは定量に
　　　最適な濃度の不純物溶液を作り定量します。

お礼

ご意見ありがとうございます！
各溶液を調整して、分析を各三回ずつ行っていたら、すごく時間がかかりました。HPLCは分析するたびに、疑問が出てくるので、奥が深いです！もっと勉強します！！