検量線の計算方法について

質問

こんにちは。
現在HPLCを扱っております。検量線を使っているのですが
計算方法がよく理解できておりません。
【化粧品100g中に有効成分Aは何g含まれているか】を求めるものです。
まず、
標準品　0g、0.1g、0.3g、0.5g　を精密に量り、全て精製水で正確に
100mlとします。この各液から、さらに1mlを精密に量りとり、精製水を
加えて正確に100mlとします。

試料は　1mlを精密に量り、精製水を加えて正確に100mlとしました。

ピークのAREAですが【標準品】
0.1g→　574221
0.3g→　1671182
0.5g→　2717212
【試料AREA】は1738876　です。
Excelで検量線の計算式を出したところ下記のような式になりました。
ｙ＝5E+06x　+　46962　　R2　＝0.9998

この場合、100g中に何g含まれているかを求めるには
どうしたらいいのでしょうか？
私なりに計算して四捨五入で0.3gとなったのですが
あっているでしょうか？

長くなってしまいましたが、教えてください！

回答No.2

WhiteBahamut · ベストアンサー

ちょっと整理するために長くなりますが、順番に書きますね。

１．まず検量線に用いた標準溶液の濃度をきちんと計算しましょう。
○標品　0g、0.1g、0.3g、0.5g
　→mgに換算すると0mg, 100mg, 300mg 500mg
○全て精製水で正確に100mlとする
　→濃度は0mg/ml, 1mg/ml, 3mg/ml, 5mg/ml
○1mlを量りとり精製水を加え100mlとする（100倍希釈）
　→濃度は0mg/ml, 0.01mg/ml, 0.03mg/ml, 0.05mg/ml
　→μgに換算すると0μg/ml, 10μg/ml, 30μg/ml, 50μg/ml

２．計算した濃度（μg/ml）を横軸xに、HPLCで得られた面積の値を縦軸yにしてグラフを描きます（エクセルならば散布図ですね）。
この時、0μg/mlの試料を分析したときの値も使いましょう（ピークが出ないのならば、面積は0とする）。

３．近似式を追加して検量線の式を計算させると、
　　　y = 54291x + 19103　　R2 = 0.9997
となります。

４．これで検量線ができたので、未知試料を分析したときのピーク面積1738876をyの部分に代入して計算します。

５．xの値として31.6769...（μg/ml）と出てきます。

６．この値はあくまでも"分析した試料"の濃度です。目的としている化粧品1mlを100mlに希釈したものがこの濃度であることから、化粧品中の濃度は100倍して約3158（μg/ml）となります。mgやgに換算しなおすと、それぞれ3.2mg/ml、0.0032g/mlとなります。

７．もし【化粧品"100ml"中に有効成分Aは何g含まれているか】ということならば、単純に濃度に100mlをかけて、0.32gとなります。
ここで注意が必要なのは、【化粧品"100g"中に有効成分Aは何g含まれているか】となっていることです。厳密には100mlと100gは同じ量を表していません。化粧品100mlの密度（g/ml）が分かればこの値を0.32にかければ【化粧品"100g"中に有効成分Aの量】が出せます。密度が不明なときは、例えば100mlを正確に量り取ってから、その質量を精密天秤で測ってください。質量÷体積で密度が計算できます。

お礼

お返事が遅くなりも仕分けありませんでした。
詳しくご説明頂いたおかげで、検量線も完成致しました。
ありがとうございました。

回答No.1

notime

試料を100倍希釈しているのを忘れていませんか？
あとmlとgの使い分けがちょっと気になりました。

お礼

回答ありがとうございます。
試料は一度しか希釈していないんです。
最後の計算で100を掛ければと思ったのですが
やはり合わせるべきでしょうか？

また単位ですが、標準と試料両方ともgで量り、メスフラスコでmlにしています！ややこしくなってしまいすみません。