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※ ChatGPTを利用し、要約された質問です（原文：初代培養）
初代培養神経細胞の凍結保存について
このQ&Aのポイント
- 初代培養の神経細胞を凍結保存する際に細胞数が減る、増えない問題が発生しています。1ヶ月ほど続いており、解決方法を探しています。
- 初代培養から約1週間の培養期間中、1日ごとにミクログリアの洗浄、mediumの交換を行っていますが、凍結保存当日に細胞数が減ったり増えなかったりする問題があります。
- 今後stockが不足する可能性があり、細胞数の増加や減少を改善する方法を模索しています。
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質問者が選んだベストアンサー
質問者さんは問題がおき初めた1ヶ月よりも前は ご自分で操作して細胞を取れていたのでしょうか。 パパイン処理の時間など(新しくなると、活性が高くなるかもしれません)、 プライマリーをとる時の細胞へのストレスは大丈夫でしょうか。 培地の見直し(サプリメントも含めて新しいものを用意) インキュベーターの見直し(温度、湿度、CO2濃度のチェック) はもうされているのでしょうか。 ネズミ？側が変わることは少ないと思いますので、 操作する側か条件が変わったのだと思います。
お礼
考えられる原因を試してみます。 ありがとうございました。 また何かあったらよろしくお願いいたします。
補足
早速の回答ありがとうございます。 ずっと自分で操作しています。パパインは1回作るのに10本(15ml Tube)くらいしか作らないのですが、今までは大丈夫でした。 でも次回パパイン処理の時間を短くしてみます。培養室内の気温も関係してくるんでしょうか？ インキュベーターについては問題ないのは確認済みです。細胞へのストレスは細心の注意をはらって行っていますが・・・。 培地に混ぜているFBSの見直しもやっぱり必要ですよね。今まで使用していたものと同じLotなのでどうかな～とは思っているのですが。 また質問になってしまいすみませんがよろしくお願いいたします。