リン酸バッファについて教えてください！

質問

今卒業論文の真っ最中です。実験で、リン酸バッファが放線菌の胞子形成を抑制しているような結果が出てしまいました。だいたいバッファというものは生物に影響を与えないものとして用いるんですけど…。意味不明の結果にびっくりしてます。そういうことってあるんでしょうか？？

回答No.1

WhiteBahamut · ベストアンサー

まず、バッファ（緩衝液）はもともとpH変化を抑えるために使っているはずです。リン酸が胞子形成を抑制する作用をもっているかどうかはわかりませんが、バッファとして用いたなら結構な濃度だと思うので、それがなんらかの影響をもたらすとしても不思議ではないと思います。

リン酸は無機栄養であり、それらが不足がちな環境では生き延びるために胞子をつくったりして休眠状態になるのでは・・・とは考えられないかなぁ。すみません。これは私の私的な推測ですので。

卒論がんばってください。

お礼

ありがとうございます！！
今回使用したリン酸バッファは0.01Ｍです。
これって濃いのでしょうか？薄いのでしょうか？
放線菌にとって…てことだから、何とも言えないんでしょうか？

回答No.4

WhiteBahamut

う～ん、私も放線菌が専門ではないので詳しくはお答えできないのですが・・・。

No.3でも書いたように「再現性がない」という問題と「リン酸バッファが胞子形成に何らかの作用をする」をいう問題は別にしたほうがいいかもしれません。

実験系が変わっているなら別の実験として考えたほうがいいかもしれません。
＞放線菌を前培養する培地を変えたり、胞子をSDSを含んだ生理食塩水に懸濁してホモジナイズしたり・・・

たとえばこれらの手順が論文や以前の実験を参考にされているならそれほど問題ないと考えられますが。

回答No.3

WhiteBahamut

確認です。

胞子形成能促進の結果が得られた8月の実験と、胞子形成能抑制の結果が得られた今回の実験で、実験条件は同一でしょうか？まさかと思いますが培養温度などは変えてないですよね？（たとえば室温での培養とか）

実験条件が完全に同一ならば同じ結果が得られないのには必ず何か原因があります。これはリン酸バッファが何らかの作用をもたらしているかいないか、という以前の問題ですから。例えリン酸バッファが胞子形成能抑制作用をもっているとしても、それは8月にも今回にも同様に利いているはずですよね？

あなたの実験条件や、論文に記載のある方法などを知らないのでなんともいえませんので、同じ研究室の先輩や同様の実験を行っている人に相談するのが解決への一番への近道だと思いますが・・・。お力になれなくて申し訳ありません。

お礼

ありがとうございます。
私の実験は、研究室に同様の実験をしたことがある人がいません。論文から引用してきたものでもないです。腐植酸が放線菌の発育に与える影響を調べるために、培地の上に、放線菌の胞子懸濁液を混合した寒天を重層し、腐植酸をリン酸バッファに溶解させたものをろ紙ディスクにしみこませて、重層した寒天の上に置くという実験です。
いろいろと事情があって、放線菌を前培養する培地を変えたり、胞子をSDSを含んだ生理食塩水に懸濁してホモジナイズしたり、ディスクにしみこませる腐植酸溶液の量を５μL増やしたり、実験系が少しずつ変わっているので、一体何が原因なのかわからなくなっているところです。
このくらいのことでは影響ないだろうと、たかをくくってやると痛い目に遭いますね。

お時間がおありになるなら、またなんでもよいので一言いただきたいです！自分の実験を客観的に見られる気がします。ありがたいです。

回答No.2

MIYD

菌じゃなくて細胞やセンチュウの場合ですが、
コントロールとして試薬を溶かしている溶媒のエタノールやDMSOだけを入れたサンプルで変化が見られることがあります。
論文や他の実験者がリン酸バッファーを使っても影響が出ていないのでしたら、
質問者さんのバッファーの作り方が疑われます。

それとNo.1で答えられているようにバッファーは一定のpHで実験を行うためのものです。
pH４．３のくえん酸バッファーでも生物に何の影響を与えないとは思っていませんよね。

お礼

ありがとうございます！
今回使用したのは0.01ＭのＰＢになります。pHは中性付近です。
もともと、このPBは腐植酸をとかすために用いたものです。今回使用したものと同じＰＢを使用して、８月頃に似たような実験をしたのですが、そのときは強い胞子形成促進がでました。腐植酸が放線菌の胞子形成を促進したんだ！！と思って、よろこんでいました。しかし、前回は放線菌の発育密度など諸条件をそろえるということを全くしておらず、再現性がない。ということで、今回諸条件をそろえて再試を行いました。そうしたら、次は抑制の結果が出てきました。原因をいろいろ考えて、もしかしてＰＢかな？と思って、ＰＢのみで同様の実験をしたところ、抑制した。ということです。

この時期にこの結果はきついです。かなり困ってます。