酵素のKm値について

質問

大学のレポート課題で、「今回の実験で得られた酵母インベルターゼのKm値と他のインベルターゼのKmや他の酵素のKmと比較して考察せよ」という問題が出されました。

今回の実験で得られたKm値：44.4[mM]

他のインベルターゼ（Sucrose-1,6-glucan 3(6)-α-glucosyl-transferase)のKm値：2.4［mM］

他の酵素（β-フルクトフラノシダーゼ）：2.6[mM]

これらのKm値はすべて最適条件下で行われた実験で得たデータです（今回の実験が本当に最適条件下で行われたかどうかは断言できませんが）。

なぜこのように大きく差が出てしまったのかが分かりません。
単に実験操作が悪かったから酵素活性が落ちたのでしょうか？

回答No.1

HHHAAA_2011 · ベストアンサー

どのような実験をされて、Km値を求められたのかわかりませんが、
レポートの課題というところをみると、おそらく学部の実習かなにかかな、
と推定します。

→つまり、両逆数プロットなどをせずに時間経過とともに活性がどのように
変化しているかをしらべて、Vmaxを出して、その半分の活性のときの酵素濃度
を求めている、と仮定します。

そうだとしたら、
(1)活性測定の方法がまずかった。
(2)温度が適切でなく失活した。
などが考えられます。

→もう少し高度に初速度を求めているのであれば、
(1)初速度の直線部分を多く取りすぎ
(2)酵素の添加量を間違っている
なども考えられます。

私はインベルターゼという酵素は知りませんが、本当なら差がないはず、
ということであれば上のような原因がぱっと思いつくところですね。
活性測定が発色反応であるとすれば、完全に発色した状態で吸光度測定を
していない、という可能性もあります。発色しきっていない、あるいは退色がはじまっているなど。

この質問文から思いつくのはこれくらいでしょうか。

お礼

回答ありがとうございます。

色々な考察があるんですね(>_<)
自分の考え方は甘すぎでした。

初速度の直線部分をあいまいにとったために出た誤差と考えることにしました。

ありがとうございました。