組織免染で困っています

質問

組織の免疫染色（IHC）で、染まらずに困っています。
ご存知の方がいらっしゃったら、
(1)推奨される賦活化法
(2)推奨される免染キット
教えてください。
一般的なモノ、方法で行っていますが染まらず…。
どうぞ宜しくお願いいたします。
組織；ヒト　
抗体；VEGF-C（R&Dsystemes）
ちなみに、薄切の状態、検体の保存法等は問題なく、
ほぼ間違いなく染まるだろう検体です。

回答No.1

warudori · ベストアンサー

賦活化にHistoVT ONE（脱パラ→７０℃～９０℃、２０分→自然放熱20分→洗浄→ブロッキング→一次抗体）などはいかがでしょうか。

締め切り後、詳細なプロトコールを書いて、BioTechnicalフォーラムなどで質問された方が良いかもしれません。

お礼

お礼が遅くなりました

ごく基本的なところでmistakeしていました

VEGF-C・一次抗体=goat
キット=EnVision=goat不可
でした
お恥ずかしいです
LSABで染色できました

賦活化は、MW10分・ph6.0でOKでした

ご教示有難うございました

回答No.2

dio-04

第一抗体をのせる際に、ブロッカーペン（またはマニキュア・マジックなど）を使っていませんか？
抗体とペンの成分の相性が悪いとまったく染まらない時がありました。

私の場合はDAKOペンでは染まらなくなり、PAPペンだと染まります。

もし使用しているようなら参考までに。

お礼

お礼が遅くなりました

ごく基本的なところでmistakeしていました

VEGF-C・一次抗体=goat
キット=EnVision=goat不可
でした
お恥ずかしいです
LSABで染色できました

ちなみに、Dakoペン使うと、やっぱり「きわ」の部分にペンの成分（油？）が滲み込んでしまう様で、端でも評価したい部分が染まらなくなってしまい、最近は手拭き（！）するようにしています

ご教示有難うございました