薄切

質問

ラットのアキレス腱の薄切が上手くできません．
脱灰作業等は必要でしょうか？
染色方法は何がよろしいでしょうか？
教えてください．お願いします．

回答No.1

sonorin

「腱」は薄切したことがないので、説得力はないかも知れませんが、基本的に線維組織ですので、脱灰は必要ありません。

ただ、非常に細くて結合の強い筋束ですので、薄切する方向によって、切りやすいか否かが決まります。
薄切の方向は、筋束に平行ですか？それとも断面を切り出しますか？
断面を切り出す場合は、心筋線維等でも同じ事が言えますが、パラフィンブロックを薄切した場合、表面が滑らかになるのに手間が掛かりますよね。この季節ですと、パラフィンブロックを十分に冷却した後薄切を開始し、荒削りの段階からあまり焦らずに丁寧に面を出し、極力表面のざらつきを作らないように気をつけます。そして、本削りの段階で、ブロックに息を吐いて、ゆっくりと刃を滑らせ、通常通りに何枚か薄切すると、滑らかな面が出てくると思います。滑らかな面が出れば、あとは慎重に薄切すればOK。ただし、薄切後にぬ湯で切片を伸ばす場合、あまり高い温度に設定せず、ぬるま湯でゆっくりと伸ばしてください。
切片を浮かべる水は、蒸留水を使用されていますか？蒸留水は幾分（120%程度）膨張する傾向にあります。特に私は神経組織を薄切することが多いのですが、いつも0.5％濃度の酢酸水を温めて使用しています。最初のうちは臭いですが、切片のしわが少なく、膨張もしないので、今はどの組織を薄切する際にも用いています。染色への影響は、今のところ認められません。

また、染色方法についてですが、sea-cさんが何をターゲットにしているか分かりませんが、通常の観察であれば、HEで十分だと思います。
その他としては、Masson-TrichromeやEVG等の線維組織染色で十分ではないでしょうか？ただ、多重染色の場合は、切片の厚さは2ミクロン程度にしなければ、観察しにくいですが。

お役に立てているかどうかわかりませんが、一応参考まで。

お礼

ありがとうございます．早速，やってみました．時間はかかりましたが，うまくいきそうです．少し，あせりすぎていたかもしれません．技術的にも未熟なところもあり，これからですが，laboでこんなことをやっている人がいなく，かつ，laboのいろんな関係で，なかなか質問できる人がいませんでした．大変，大変　助かりました．また，よろしくお願いします．