pi3-kinase の回答履歴

時間、手間がかかるwestern blotって難しい実験なんですか？ CBBより感度は良いようですが。 フィルムに焼くとき汚れ（バックグラウンド）がでてきて困っています。

時間、手間がかかるwestern blotって難しい実験なんですか？ CBBより感度は良いようですが。 フィルムに焼くとき汚れ（バックグラウンド）がでてきて困っています。

あるサイトカイン遺伝子の発現をリアルタイムPCRを用いて定量しようとしています。検出系はSYBRを考えており、TaqManもSYBRが無理なら考えています。 現在プライマーを作製して、感度を調べている段階なのですが、スタンダードカーブがうまくひけずに困っています。 コピー数のわかっているテンプレートをスタンダードに用いるとよい、とおそわったのですが、その方法について若干判らないところがあるので質問させていただきます。 方法は、PCR産物をプラスミドに組み込み、その濃度、分子量等からコピー数を求めるということでしたが、 コピー数の求め方がよくわかりません。 考え方を教えていただけたければ幸いです。

細胞の情報伝達を説明する上で、『シグナル、受容体、セカンドメッセンジャー、タンパク質リン酸化リレー』といった用語がでてきます。 各用語の意味は本などで調べて理解したのですが、実際、どのようなときにこのような情報伝達が起こっているのかが、いまいち結びつきません。 上記した用語と結びつけて、情報伝達の有名な事例をご教示いただきたいと思います。よろしくお願いします。

現在、阻害剤を使った細胞の増殖活性実験をＭＴＴアッセイを用いて行っています。 その際にウェルの付着した細胞のみを対象としたいために（浮遊細胞はいらないです）、ＭＴＴを入れてインキュベートした後に、９６ウェルをひっくり返して上澄みを捨てる方法と、ピペットで１ウェルずつ上澄みを吸い上げて捨てる方法を取っているのですが、どうも値のズレが大きく信用性がありません。このようなＭＴＴアッセイにはコツなどがあるのでしょうか？ それと一般的な阻害実験の場合には、１ウェルに入れる細胞数などというのはだいたい決まっているのでしょうか？ ＭＴＴアッセイを初めて行うような初心者ですので、初歩的な質問かと思いますがご教授よろしくお願いいたします。

ポルトガルに個人で旅行に行きます。 宿泊場所はポルト3泊、リスボン3泊です。 ナザレ、シンドラー、ロカ岬、コインブラには行く予定です。 どういったコースで行くと一番いいか、移動にはバスと列車とどっちが良いが、また他にもオススメの観光地などあったら教えてください。 それからおいしい料理とかおみやげなども教えていただけたら幸いです。

大腸菌を用いて15k程度のタンパク質を発現させてるんですが、ほとんど不溶画分にいってしまい、現在は変性剤等を用いて可溶化を試みています（低温培養、アルギニンの導入はダメでした） そこで初歩的な質問なんですが、 1、変性剤を用いるとタグまで変性してしまうのでしょうか？また、タグが変性してしまった場合、樹脂には吸着しないものなんでしょうか？（使っているタグはGSTです） 2、変性剤でタンパク質をグチャグチャにし、その後変性剤を取り除き、タンパク質を巻き戻すことで可溶化させるという手法において、どの段階で可溶化が起きているのかがわかりません 「タンパク質が正しい構造をとった状態（refolding）＝可溶化した状態」ということなのでしょうか？それとも変性した段階で可溶化が起っているのでしょうか？ よろしくお願いします。

一週間青森に旅行をすることになりました。 リュックで荷物が重すぎたという苦い思い出があるので、 今回初めてスーツケースを購入。 店頭で悩み、大きすぎても持ち運びが大変そうなので中型サイズ（H58×W37×D22cm）を選びました。 それで、家に持ち帰り荷物を入れてみたのですが思ったより小さい！？ 最低限必要だと思われるものを入れたんですが、 もうスペースが無くパンパンです！ お土産も買うのでもう少し余裕が欲しいし。 かといって仕事もかねているので荷物を減らすのも難しいですorz 身軽さに憧れたのに…本末転倒なんですが、 別にカバンを別に持っていこうと考えています。 スーツケースのとって？？の部分につけられるカバンがあれば身軽で便利だと思うのですが、 そのような物でお勧めがあれば教えて頂けないでしょうか？ 自分で検索をしてみて一つは見つかったのですけど、 オジサンが持つような物しかなくて…。 できれば可愛かったり、おしゃれなものが希望です。 よろしくお願いします！

かなり初心者です。 細胞毒性評価の一手法として、MTSアッセイを検討していますが MTTアッセイと比較して、メリット／デメリットをご教示お願いできませんでしょうか？ よろしくお願いします。

βアドレナリン受容体の活性化とcAMP量を調べる実験なのですが、アゴニストであるisoproterenolを様々な濃度で加えたものと、アンタゴニストであるalproterenolを様々な濃度で拮抗的に作用させたものを用意して、450nmで吸光度を測定しました。 アゴニストはcAMP量を上昇させるので、吸光度は濃度があがるにつれて、高くなるのではないかと思っていたのですが、逆に下がっていきました。また、アンタゴニストではアゴニストと逆の結果がでました。 それで、考えてみたのですが、理由がよくわかりません。吸光度はcAMP量をはかっているのではないのでしょうか？ よろしくお願いします。

サンプルの蛋白をBufferで補正する意味を教えてください。 自分の頭の中では同じような比率になるように薄めると定量性がなくなるんではないか？と思ってしまうのですが。。

サンプルの蛋白をBufferで補正する意味を教えてください。 自分の頭の中では同じような比率になるように薄めると定量性がなくなるんではないか？と思ってしまうのですが。。

週末に２泊３日ではじめて広島へ行きます。 広島に行ったら絶対「お好み焼き」「あなごめし（うえの）」を 食べようと思ってますが、他にこれだけは食べておけ！ というものがありましたらおすすめ店など教えて頂けますでしょうか。 また、私はお刺身が大好きなのですが、今が旬、広島ならではの魚も 教えて頂けるとうれしいです。 お土産で「もみじ饅頭」以外のもおすすめ品も教えて下さい。 あと、ご当地Ｔシャツを買いたいのですが、広島弁が書いてある Ｔシャツって売ってますか？例えば『かばちたれ』とか・・・ 教えてばかりですみませんが、宜しくお願いします。 ちなみに日程はこんな感じです↓ １日目：宮島をじっくり見てまわります。（ホテルは宮島近く） ２日目：広島市内に移動。ホテルは平和記念公園近く。 　　　　原爆ドームなどへ行きます。 ３日目：朝１０時半頃の飛行機で東京へ

100 mM Tris-HCl と 1 M NaCl 水溶液, および蒸留水を, それぞれどれだけずつ混合すればよいか教えてください。 (a) 20 mM Tris-HCl を 20 ml (b) 20 mM Tris-HCl, 10 mM NaCl を 10 ml (c) 20 mM Tris-HCl, 20 mM NaCl を 10 ml

こんにちは、初めて投稿いたします。 10月末or11月頃に夫婦二人でヨーロッパに行こうと思っています。 私にとっては、初めての海外旅行です。 (私はマダ、パスポートも持っていない位の初心者です。) 今後、ヨーロッパに行ける事も当分無いと思いますので ７日間位で、２カ国位回りたいと思っています。 ヨーロッパに行くならスペイン、フランス、ベルギーの ３カ国の中から、２カ国位に行きたいと思っていましたが、 実際に旅行会社に聞きに行くとスペインとフランス等、 私の行きたい国の２カ国でのツアーは殆どありませんでした。 私の行きたい国でのツアーは無理があるのでしょうか？ 全てが初心者の為、何が必要なのか、何が分かっていないと いけないのかすら分かりませんので、私に何か良いアドバイス ありましたら(参考書籍、HP等)、よろしくお願い致します。

原爆ドーム見学や飲食する為の駐車場で、広くて平面の所、立体でも坂が緩やかな所を探しています。（車高が低い為） 教えてください。 宮島口周辺についてもよろしくお願いします。 また、みろくの里、マツダミュージアムに行ったことある方、感想を教えてください。行くべきか辞めるか悩んでいます。

基本的な事で本当にすいません。 RNAを抽出した後、逆転写酵素を使ってcDNAを作った際に言われた事なのですが、 「RNAはすぐに分解されやすいのですぐに凍結保存すること」 「cDNAは安定なので多少室温においていても全然大丈夫」 いずれも構造上は一本鎖なので安定性は同じように思えるのですが、この違いは何なのでしょう？？同じRNAからコピーして作られたものだからほとんど同じような構造しているはずですよね？ ちなみに同じ様な質問になってしまうのかもしれませんが、RNaseでcDNAは分解されず、DNaseで分解されるのもなぜなのか？？？です。 教えて下さい。宜しくお願い致します。

SiRNA（２本鎖のオリゴ）をプラスミドベクターに挿入しようと思ってます。 そこでライゲーションの方法ですが、普通にT4DNAリガーゼを使ってもできますでしょうか。 プラスミドはDNAですが、挿入するのはSiRNAなのです。 いかがでしょうか。

膜蛋白をコードする遺伝子（Igf1r）をクローニングし、リコンビナント蛋白として発現させ、この蛋白に対するモノクローナル抗体を作成したいのですが、目的の蛋白は195個のアミノ酸より構成されています。 ベクターにもよるのでしょうが、どれ位のサイズでベクターに組み込めばよいのでしょうか？

膜蛋白をコードする遺伝子（Igf1r）をクローニングし、リコンビナント蛋白として発現させ、この蛋白に対するモノクローナル抗体を作成したいのですが、目的の蛋白は195個のアミノ酸より構成されています。 ベクターにもよるのでしょうが、どれ位のサイズでベクターに組み込めばよいのでしょうか？