sachihappy777 の回答履歴

現在、接着系ヒト癌細胞を使っております。 継代の際に、容器中培養液の1/5量のトリプシン/EDTAを添加して、3分インキュベートしてから、同量の培養液を入れて、ピペッティングして細胞を剥がしております。 しかし、なかなかプレートから細胞が剥がれず、インキュベート時間を長くしたり、セルスクレーパーを用いたりして無理やり剥がしてみたのですが、細胞塊が増えるだけで、細胞がバラバラになってくれません。 遠心をして、トリプシン溶液を除いて培養液中でピペッティングしても細胞塊状態で、細胞がバラバラになってくれません。 現在、他に教えていただく方がおりませんので、ご教授よろしくお願いいたします。

現在、接着系ヒト癌細胞を使っております。 継代の際に、容器中培養液の1/5量のトリプシン/EDTAを添加して、3分インキュベートしてから、同量の培養液を入れて、ピペッティングして細胞を剥がしております。 しかし、なかなかプレートから細胞が剥がれず、インキュベート時間を長くしたり、セルスクレーパーを用いたりして無理やり剥がしてみたのですが、細胞塊が増えるだけで、細胞がバラバラになってくれません。 遠心をして、トリプシン溶液を除いて培養液中でピペッティングしても細胞塊状態で、細胞がバラバラになってくれません。 現在、他に教えていただく方がおりませんので、ご教授よろしくお願いいたします。

Reverse genetics systemによりスペイン風ウィルスを合成したとの報道がありました。高等動植物の遺伝子をノックアウトするReverse geneticsとは異なる意味と思います。簡単に理論をご教示ください。

はじめまして。 このコーナーに初めて投稿します。 実は、教授のセクハラによって二年前から鬱病になりました。今は、抗うつ剤は飲まず、精神安定剤だけでおさまるようにはなりました。この病気と闘った二年間はだだひたすらに病気を治すことばかりに専念してきました。そのために好きな仕事もセーブした日々で、今振り返っても二年もたったとは思えなく時間感覚がありません。 また、最大の悩みとして、自分の存在が現にあると自分で認識できないのです。自分が幽霊か透明人間のような感じです・・・。 このような感覚になられた方はいますか？またどのように克服されたかも教えて下さい。不安でいっぱいです。

先日、病院で緊張性頭痛と診断されました。脳のＣＴ、ＭＲＩは異常なし。血液検査、心電図も異常無しでした。 病院の先生に『この頭痛は肩や首が緊張していて、それが頭痛として現れている』と、言われ、緊張を解く薬と筋肉をほぐす薬をもらっている状態です。 その後も頭痛が続いていたので病院へ行ったところ『精神的なストレスが原因で軽い鬱になっていて それが原因で頭痛→肩こり、もしくは鬱→肩こり→頭痛 または、肩こりがストレスとなって頭痛→鬱、もしくは肩こり→鬱→頭痛でetc どうやら、この３つの病気がつながっているかも』と、言われましたが、そのような流れって言うのは良くあることなのでしょうか？

現在BioradのOpticonリアルタイムPCRマシーンを使っています。 Melting Temperatureを見ると設計したプライマーによるPCR産物が100bpから130bpであるため大体80度以上になっています。 今まではPCRをかけるときにアニール温度を前の実験者がやっていたように55度で行っているのですが、より早く終わらせることが出来ないかなと思うようになりました。 94度30秒、55度30秒、72度30秒という設計ですが、 Melting Temperatureが80度以上ならアニール温度を72度に設定できないかと思うのです。 たとえば94度30秒、72度45秒とかにして、アニール温度とエクステンションの温度を続けてやってしまうのもいいのかと思うのです。 こうすればさらに特異性も増すのではないかと思うのですが、 みなさんは何度の設定を使っていますか？

　利き手と逆の手で作業をしたときにかかるストレスが、血糖値に与える影響について実験をし、論文を作成しています。 　これと同じようなことをし、論文を発表している人はいないものかと、文献を検索しているのですが、なかなか見つかりません。 　どなたか、このような論文をご存知ではないでしょうか？また、論文自体をご存知でなくても、こういった論文（日本語か英語）を効率的に探し出せるサイトなどご存知でしたら、教えてください。

うつ病で休職中です。 気分も体もずいぶん調子よくなって来たものの、とにかく 何をするにも億劫です。 そろそろ仕事に戻らなければと思うのですが、どうしてもその意欲がわきません。 怠け病になってしまったのかとも思います。 うつで復職に成功された方、復職されたのはどのようなタイミングでしょうか。 焦らず待っていれば自然と会社に行きたい、行こう、と思えてくる ものでしょうか。 でも、このままだと、単にずるずると怠けているだけのような気もしてきます。 億劫なのを堪えて、なんとか会社へ行かないと、復職出来ないのでしょうか。 みなさん、そうやって頑張って復職されるものなのでしょうか。 よろしくお願いします。

PCR で使われる5’と3’の表記で困っています。 実習でPCRとプライマーの設計デモをやりました。ソフトウエアを使ってプライマーを設計すると、いくつか候補が出ます。これは、3―・・・ ―5’で表示されるのが一般的だと教えられました。実際の実習では、既に準備されたプライマーを使ったんですが、プライマー合成した会社からの詳細コピーも配られました。そこには5’―・・・ ―3’と明記されており配列は同じでした。もし、5’―・・・ 3’の方向で書くのら、配列はソフトウエア上で出たものとは逆になるはずでは？設計デモの時、チューターからは「プライマーの始まりはGCリッチに」とも言われました。3’末端の配列はGかCが望ましいという条件があることから考えると、やっぱりプライマーの始まる方を3’として、配列は、3’―・・・ ―5’で記載するのが一般的なのだろうなと想像してます。 よく本には以下のような模式図が出ています。 5’―・・・ ―3’　 3’―・・・ ―5’　　 の2本鎖が熱で、5’―・・・ ―3’　と3’―・・・ ―5’　という1本鎖に別れる。で、5’―・・・ ―3’　の鎖では　鎖の3’側へ　5’―・・・ ―3’　のプライマー（これがリバースプライマー！？）がくっ付いて、プライマーの5’を起点にして5’→3’方向へDNAが合成される。　 3’―・・・ ―5’　の鎖でも　鎖の3’側へ　5’―・・・・ ―3’　のプライマー（こっちがフォワードプライマー！？）がくっ付いて以下同様。 だとしたら、プライマーの配列が3’から記載されるのはおかしいと思うのですが。 プライマーの配列そのものの向きではなく、プライマーがアニールするテンプレートの配列を基準に　3’と5’を考えているということなんでしょうか？

雌はホルモンの影響とかで実験結果にばらつきがでるので、雄が実験に使われることが多いと聞きました。なのに妊娠期などをみるといった以外で実験に雌が使われている場合、何か理由はありますか？

genomic DNAをPCRで増やして電気泳動する際に使うゲルを作るとき、アガロースをEtBr入りのBufferで溶媒とし、レンジで温めて溶かすのですが、その際沸騰させてはまずいでしょうか？ EｔBrが失活してしまうということはありますか？ 基本的なことで申し訳ないですが、教えてください！

鬱病歴約２年です。 現在は大学病院の精神科に通っています。 ことサイトや２ちゃんねる等でも定期的にあがっている話題であることは検索で知りました。 以下私のパキシル服用歴です。 約1年40mg/1日（今の精神科の前の心療内科でも処方されたことがありましたが、具体的な量はよく覚えていません） その他にはアモキサン、サイレース、レスリン、レンドルミンを服用しています。 １．効果を感じれなった ２．攻撃性？を明確に認識した 以上の２点の理由により医師に相談 １ヶ月前より20mg/1日に減薬 それでも攻撃性が収まらないので服用の中止を希望しました。 １週間前より完全にパキシルを断薬しました（抗鬱薬はアモキサン１本に切り替えました）。 その結果以下の２点の症状がでました。 １．頭がキンキンする（これは皆さん共通のような） ２．非常に現実感のある夢 特に２が怖いです。 これでは精神科に通ってかえって頭がおかしくなったような気がします。 パキシルは夢の万能薬のように考えている風潮があるような気がしますが、 この薬正直やばくないですか？ 次回の通院まで約２週あるのと、患者側の体験をお聞きしたくて質問させて頂きました。 尚、鬱に対して効果がある方が多数いらしゃることは充分承知しています。 よろしくお願い致します。

PCR で使われる5’と3’の表記で困っています。 実習でPCRとプライマーの設計デモをやりました。ソフトウエアを使ってプライマーを設計すると、いくつか候補が出ます。これは、3―・・・ ―5’で表示されるのが一般的だと教えられました。実際の実習では、既に準備されたプライマーを使ったんですが、プライマー合成した会社からの詳細コピーも配られました。そこには5’―・・・ ―3’と明記されており配列は同じでした。もし、5’―・・・ 3’の方向で書くのら、配列はソフトウエア上で出たものとは逆になるはずでは？設計デモの時、チューターからは「プライマーの始まりはGCリッチに」とも言われました。3’末端の配列はGかCが望ましいという条件があることから考えると、やっぱりプライマーの始まる方を3’として、配列は、3’―・・・ ―5’で記載するのが一般的なのだろうなと想像してます。 よく本には以下のような模式図が出ています。 5’―・・・ ―3’　 3’―・・・ ―5’　　 の2本鎖が熱で、5’―・・・ ―3’　と3’―・・・ ―5’　という1本鎖に別れる。で、5’―・・・ ―3’　の鎖では　鎖の3’側へ　5’―・・・ ―3’　のプライマー（これがリバースプライマー！？）がくっ付いて、プライマーの5’を起点にして5’→3’方向へDNAが合成される。　 3’―・・・ ―5’　の鎖でも　鎖の3’側へ　5’―・・・・ ―3’　のプライマー（こっちがフォワードプライマー！？）がくっ付いて以下同様。 だとしたら、プライマーの配列が3’から記載されるのはおかしいと思うのですが。 プライマーの配列そのものの向きではなく、プライマーがアニールするテンプレートの配列を基準に　3’と5’を考えているということなんでしょうか？

PCR で使われる5’と3’の表記で困っています。 実習でPCRとプライマーの設計デモをやりました。ソフトウエアを使ってプライマーを設計すると、いくつか候補が出ます。これは、3―・・・ ―5’で表示されるのが一般的だと教えられました。実際の実習では、既に準備されたプライマーを使ったんですが、プライマー合成した会社からの詳細コピーも配られました。そこには5’―・・・ ―3’と明記されており配列は同じでした。もし、5’―・・・ 3’の方向で書くのら、配列はソフトウエア上で出たものとは逆になるはずでは？設計デモの時、チューターからは「プライマーの始まりはGCリッチに」とも言われました。3’末端の配列はGかCが望ましいという条件があることから考えると、やっぱりプライマーの始まる方を3’として、配列は、3’―・・・ ―5’で記載するのが一般的なのだろうなと想像してます。 よく本には以下のような模式図が出ています。 5’―・・・ ―3’　 3’―・・・ ―5’　　 の2本鎖が熱で、5’―・・・ ―3’　と3’―・・・ ―5’　という1本鎖に別れる。で、5’―・・・ ―3’　の鎖では　鎖の3’側へ　5’―・・・ ―3’　のプライマー（これがリバースプライマー！？）がくっ付いて、プライマーの5’を起点にして5’→3’方向へDNAが合成される。　 3’―・・・ ―5’　の鎖でも　鎖の3’側へ　5’―・・・・ ―3’　のプライマー（こっちがフォワードプライマー！？）がくっ付いて以下同様。 だとしたら、プライマーの配列が3’から記載されるのはおかしいと思うのですが。 プライマーの配列そのものの向きではなく、プライマーがアニールするテンプレートの配列を基準に　3’と5’を考えているということなんでしょうか？

MDCK(Madin-Darby canine kidney)とはどんなもので、どのように使用するかご存じの方いらっしゃいます？この細胞を使用するメリットなどもご存じでしたら教えて下さい。よろしくお願い致します。

ＨＳＶやポリオウイルスに感染したVero細胞を用いてウエスタンブロッディング法を行いました。 すると、色のことなるバンドが数本見えました。 自分は、濃いバンドほど病原性が強いのではないかと考えたのですが、 ほかに何かわかることがあれば聞かせてもらえないでしょうか？

先日、心療内科で鬱病と診断されました。 そこでトフラニール１０ｍｇとリーゼ５ｍｇを処方されました。 トフラニールは朝のみ、リーゼは朝と夜に飲むように言われました。 わたしは元々頭痛持ちで、１日に２回は頭痛薬（イヴＡ錠）を飲みます。 そこで質問なんですが、この鬱病の薬を飲みながら 今まで通り頭痛薬を飲むのは大丈夫でしょうか？ 診察の際、先生にもよく頭痛薬を飲む、という話をしたのですが それでも薬を処方された、ということは飲んでも大丈夫だということなのでしょうか。 今とても頭が痛いのですが、頭痛薬を飲んでもいいものか悩んでいます。 ちなみに鬱病の薬を飲み始めたのは昨日からです。 また、もう一つ質問？があります。 今回、病院で鬱病と診断されたことでホッとしている自分がいるんです。 もともとは学校に行けなくなったのが一番の症状？なのですが、 そのことにちゃんとした理由がついたことに対して安心したのだと思います。 でもこれって、鬱病を言い訳にするようなずるい考えのような気がして… 本当は自分の甘えで学校に行かないだけなのに、 もしかして逃げているだけなのかなぁと罪悪感が芽生えています。 確かに世間一般で言う鬱病の症状には当てはまる点が多々あるのですが 私は本当に鬱病なのか、そのことにさえ疑問を感じています。 そのせいで、親にも鬱病と診断されたことを言えないでいるのですが… 同じように感じたことがある方、いらっしゃるでしょうか？ 自分でもどういう意見が欲しいのかが分からないのですが、 何かアドバイスをお願いします。

妊娠４週目です。 まだ心拍の方は確認できていません。 私は昔からパチンコが好きです。 妊娠がわかってからやめようと思っているのですが急にはやめれなくて… そこで質問なんですが妊娠時のパチンコはやはりダメでしょうか？ 胎児にどんな影響がでるのでしょうか？

　PCR法で処理したDNAをアガロースゲル電気泳動をしました。 　 　レーン１　DNA分子量マーカー（１Kｂｐ） 　レーン２～レーン４　PCR産物１ 　レーン５　DNA分子量マーカー（１００ｂｐ） 　レーン６～レーン８　PCR産物２ 　レーン１からレーン４はアプライする時にゲルにさしてしまいました。 　レーン５～レーン８はアプライは綺麗にはいりました。 　結果はレーン１からレーン４まではバンドが見えたが、レーン５はライトにあてるとやっとなんとか見える程度で、レーン６～レーン８は何も見えなかった。 　レーン６からレーン８はPCR産物２を入れ忘れたと考えられるが、レーン５の分子量マーカーがきちんとでなかった理由がわかりません。 　どのような理由が考えられるでしょうか？ 　またアプライするときにゲルにさしてしまったことで、さしてない方に影響出たりはするんでしょうか？

　PCR法で処理したDNAをアガロースゲル電気泳動をしました。 　 　レーン１　DNA分子量マーカー（１Kｂｐ） 　レーン２～レーン４　PCR産物１ 　レーン５　DNA分子量マーカー（１００ｂｐ） 　レーン６～レーン８　PCR産物２ 　レーン１からレーン４はアプライする時にゲルにさしてしまいました。 　レーン５～レーン８はアプライは綺麗にはいりました。 　結果はレーン１からレーン４まではバンドが見えたが、レーン５はライトにあてるとやっとなんとか見える程度で、レーン６～レーン８は何も見えなかった。 　レーン６からレーン８はPCR産物２を入れ忘れたと考えられるが、レーン５の分子量マーカーがきちんとでなかった理由がわかりません。 　どのような理由が考えられるでしょうか？ 　またアプライするときにゲルにさしてしまったことで、さしてない方に影響出たりはするんでしょうか？