unaplasm の回答履歴

初歩的な質問ですみません。ある遺伝子のあるエクソンが、片方だけ（ヘテロ）欠損しているかどうかを確かめるのは、どういう実験をすればよいでしょうか？ DNAシーケンスしても、もう一方は正常なので、欠損が読み取れないと思うのですが、どうすればよいでしょうか。 知識のある方、ご回答お願いします。

ALDH2遺伝子の変異を調べたくPCRを行いましたが上手くいきません。 条件は以下のように行いました。 ネガティブコントロールもサンプルも、すべて同じ20～30bpあたりにバンドがでてしまいます。 コンタミしたのかと思い、すべて試薬、水を新しいものに取り換えて、 ピペットもフィルター付チップに代えましたが同じ結果が出てしまいます。 プライマーは自分で作成したのではなく、ニッポンジーンで紹介されていたものを使用しています。 初心者で、どこを直したら良いのか分からず質問させていただきました。 どなたかアドバイスをください。 2×Ampdirect plus　　　　10.0μl F-primer（50μM）　　　　　0.2μl R-primer（50μM）　　　　　0.2μl DDW　　　　　　　　　　　　　8.5μl Nova Taq（Hot start）　　　0.1μl DNA（ネガコンに水 ） 　　　1.0μl 94℃　2分 - （94℃　30秒 - 60℃　30秒 - 72℃　20秒）30サイクル - 72℃　5分 プライマーは、以下の２パターンです。TEで50pmol/μlに溶解されたものを購入 Ｆ-primer　5'-CAA ATT ACA GGG TCA ACT GCT-3' R-primer 5'-CCA CAC TCA CAG TTT TCT CTT C-3' （正常型） Ｆ-primer　5'-CAA ATT ACA GGG TCA ACT GCT-3' R-primer 5'-CCA CAC TCA CAG TTT TCT CTT T-3' （異常型）