unaplasmのプロフィール
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- 登録日2013/04/28
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- エクソンの欠損が片方だけ(ヘテロ)。確かめる実験?
初歩的な質問ですみません。ある遺伝子のあるエクソンが、片方だけ(ヘテロ)欠損しているかどうかを確かめるのは、どういう実験をすればよいでしょうか? DNAシーケンスしても、もう一方は正常なので、欠損が読み取れないと思うのですが、どうすればよいでしょうか。 知識のある方、ご回答お願いします。
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- 生物学
- noname#178663
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- PCRがうまくいきません
ALDH2遺伝子の変異を調べたくPCRを行いましたが上手くいきません。 条件は以下のように行いました。 ネガティブコントロールもサンプルも、すべて同じ20~30bpあたりにバンドがでてしまいます。 コンタミしたのかと思い、すべて試薬、水を新しいものに取り換えて、 ピペットもフィルター付チップに代えましたが同じ結果が出てしまいます。 プライマーは自分で作成したのではなく、ニッポンジーンで紹介されていたものを使用しています。 初心者で、どこを直したら良いのか分からず質問させていただきました。 どなたかアドバイスをください。 2×Ampdirect plus 10.0μl F-primer(50μM) 0.2μl R-primer(50μM) 0.2μl DDW 8.5μl Nova Taq(Hot start) 0.1μl DNA(ネガコンに水 ) 1.0μl 94℃ 2分 - (94℃ 30秒 - 60℃ 30秒 - 72℃ 20秒)30サイクル - 72℃ 5分 プライマーは、以下の2パターンです。TEで50pmol/μlに溶解されたものを購入 F-primer 5'-CAA ATT ACA GGG TCA ACT GCT-3' R-primer 5'-CCA CAC TCA CAG TTT TCT CTT C-3' (正常型) F-primer 5'-CAA ATT ACA GGG TCA ACT GCT-3' R-primer 5'-CCA CAC TCA CAG TTT TCT CTT T-3' (異常型)
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- m_mutation
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